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AWANGJIACUO新虫 (初入文坛)
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16s rDNA菌种鉴定TA克隆后非空载条带大小却不对 已有1人参与
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各位虫友，本人最近在做一份16s rDNA菌种鉴定，是肠道微生物提取的DNA，经27F和1492R扩增条带很亮，回收后直接测序峰图显示模板不纯，故做TA克隆，转化涂板后做菌落PCR显示大部分为阳性克隆，条带大小约1500bp，然后提取相应质粒进行测序，问题出现了：正向M13-47测出几乎都是载体序列，反向M13-48所测结果却非载体序列且可以找到27F引物序列，这是什么原因造成的，是PCR产物降解了吗，但菌落PCR条带大小却又是正确的？ 哪位虫友有想法 ，帮帮忙，多谢多谢哦！ |
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2楼2016-05-11 09:28:46
AWANGJIACUO
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3楼2016-05-11 10:11:13
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4楼2016-05-13 11:35:45