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WO要的梦

铁虫 (初入文坛)

[求助] C18柱的柱效下降得很厉害,有什么方法可以恢复吗? 已有2人参与

最近开始做液相,用C18柱筛选流动相,用过两次含有三乙胺(用量很少)的流动相,还用过两次缓冲液PH为2.5的流动相,每次用甲醇和水冲柱子半小时,然后用甲醇冲半小时封柱。
目前用的是含有缓冲盐PH4.0的流动相,今天做液相的时候,发现药物的出峰时间差距特别大,相邻两次进样的出峰时间相差0.2,出峰时间从8.2依次变成8.4,8.6,8.7,8.9。
应该是柱效变差了,可是这是什么原因造成的呢?是因为使用了三乙胺,还是之前用的PH2.5的缓冲液酸度太大,还是冲柱子时间太短了呢。
另外,目前的情况应该怎么解决呢?我准备用10%的甲醇水溶液冲柱过夜,能改善柱效下降的问题吗。难道只能重新换柱子吗?

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mozart13

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看上去像是缓冲盐把柱子堵了 缓冲液有盐离子的话不应该用纯甲醇冲柱子 用水加10%甲醇 低流速 走10到20个柱体积 有温控的话也可注意调节 提高盐离子在洗脱液中的溶解度
Live, Laugh, Love!
2楼2016-05-10 05:33:06
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月光晒谷

铜虫 (小有名气)

你的色谱柱ph范围是多少?峰形变差了吗,压力升高了吗,塔板数降低了吗,等度还是梯度,个人感觉是不是你平衡时间太短。

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3楼2016-05-10 12:44:51
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WO要的梦

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 月光晒谷 at 2016-05-10 12:44:51
你的色谱柱ph范围是多少?峰形变差了吗,压力升高了吗,塔板数降低了吗,等度还是梯度,个人感觉是不是你平衡时间太短。

PH范围应该是2到8吧,
把柱子冲了一段时间,重新做液相的时候,发现柱子已经恢复正常了,不过确实所需的平衡时间较长。
前一次测定的时候,开始进样的时间应该是早了

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4楼2016-05-12 23:59:59
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愤怒的菠菜

新虫 (初入文坛)

一般带缓冲盐的流动相我都要冲20个柱体积 90分钟左右

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5楼2016-05-13 11:41:19
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

平衡的不够,继续平衡,如果是梯度的话,在程序末尾需要有平衡时间。
6楼2016-05-13 14:22:55
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wode1jia2

新虫 (正式写手)

色谱柱是有PH使用范围的,过酸或过碱都会降低柱效……使用缓冲盐,一定要注意用前过渡,用后冲洗……还有就是要平衡时间足够……

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7楼2016-05-13 22:25:03
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淫渣大人

铜虫 (小有名气)

0.1%的tfa就会使ph达到2.7左右
8楼2017-01-15 15:11:18
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