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关于大肠杆菌破壁问题,蛋白电泳,上清中没有目的条带 求解
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本人最近构建了,植酸酶的重组菌株,载体为pET28a,表达菌株是BL21(de3) 问题是诱导表达后的菌株,全细胞跑蛋白电泳有目的条带,但是细胞破碎后,上清中没有目的条带,沉淀中有。 先问下是什么原因,是没有破开还是形成包涵体了? IPTG诱导浓度为1mM,od 2,诱导24h,请大神解答,谢谢了 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2016-05-08 21:32:24
xuweitao
铁杆木虫 (著名写手)
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3楼2016-05-09 09:49:32
4楼2016-05-09 14:11:51
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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| 估计是形成包涵体了,包涵体你先跑一下看是否有结果,包涵体要先变性在复性,操作比较困难,或结果不一定是好的,具体的包涵体复性步骤及实验FAQ,可以访问:http://www.detaibio.com/topics/inclusion-body-refolding-introduction.html |
5楼2016-05-09 17:53:11
hc-material
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6楼2016-05-12 09:31:36
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