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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » issr-pcr反应体系优化
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肉肉sr

新虫 (初入文坛)

[求助] issr-pcr反应体系优化 已有2人参与

条带和marker比很暗 ，而且盒用mix做的时候比条带少了 离点样空近的条带不见了 图的话大概就是下面那样 做的是植物遗传多样性 现在很迷茫 不知道有没有哪位大神可以给点意见

issr-pcr反应体系优化


@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2016-05-08 17:24:20
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肉肉sr

新虫 (初入文坛)
顶起来

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2楼2016-05-09 07:53:14
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加大上样量，普通PCR只有一条特异带，5ul能看到很明显，ISSR条带那么多，每条都弱一些，次带更弱，上样量加大到20ul以上。如果能先纯化脱盐一下，电泳效果更好。
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为什么
3楼2016-05-09 11:14:06
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xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
ISSR的重复性不是很好，我之前做的时候也经常出类似的问题，有的时候几十个样品里面只有一两个跑空板。你可以看看是不是样品没有混匀，或者再跑一遍，就可能有不一样的效果。
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我努力，我坚持，我成功！
4楼2016-05-09 14:16:22
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肉肉sr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xujingyuanxu at 2016-05-09 14:16:22
ISSR的重复性不是很好，我之前做的时候也经常出类似的问题，有的时候几十个样品里面只有一两个跑空板。你可以看看是不是样品没有混匀，或者再跑一遍，就可能有不一样的效果。

是啊，今天做按之前的条件就做不出来了 哎 弄了快一个月 一无所获啊

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5楼2016-05-09 14:35:43
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肉肉sr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 547star at 2016-05-09 11:14:06
加大上样量，普通PCR只有一条特异带，5ul能看到很明显，ISSR条带那么多，每条都弱一些，次带更弱，上样量加大到20ul以上。如果能先纯化脱盐一下，电泳效果更好。

重复性好差啊 按以前的条件也跑不出来 不懂是什么原因啊

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6楼2016-05-09 14:36:54
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xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 肉肉sr at 2016-05-09 14:35:43
是啊，今天做按之前的条件就做不出来了 哎 弄了快一个月 一无所获啊
...

最好是所有样品一起上PCR

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我努力，我坚持，我成功！
7楼2016-05-09 18:41:55
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