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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒双酶切。
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yuan720222

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒双酶切。 已有5人参与

提取的质粒，经过双酶切，目的片段是2781bp，载体的片段是2686bp经双酶切后，发现只有一条带，目的片段和载体都处于一个位置，怎么才能跑开两条带？紧急紧急
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1楼 2016-05-07 07:12:56
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yuan720222

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-05-08 08:33:43
不明白你实验的目的是什么，你是要回收pcr产物进行酶切？还是要回收酶切下来的目的片段？
...

我之前双酶切，切得是质粒，因为质粒的大小正好是目的片段的一半，这样进行双酶切之后，电泳跑胶分不开，所以现在打算直接对PCR回收纯化产物进行双酶切，双酶切后可不可以不跑胶，直接对双酶切后的体系进行纯化？
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11楼2016-05-08 16:21:18
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liuyuxue

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不行再做一次酶切，找个在载体片段上有酶切位点的
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花落人亡两不知
2楼2016-05-07 10:12:01
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
明显用3酶切，把载体上有的单一位点一起切了，载体被切切碎不就行了么
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3楼2016-05-07 10:37:32
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yuan720222

新虫 (初入文坛)
你好，是对载体上的每一个酶切位点（除目的片段所包含的）都进行单酶切吗
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4楼2016-05-07 18:40:48
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