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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 想请教DNS法测CMC-Na酶活怎么计算？【附实验过程和标准曲线值】
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天使惠

铁虫 (初入文坛)

[求助] 想请教DNS法测CMC-Na酶活怎么计算？【附实验过程和标准曲线值】 已有1人参与

想请教下各位前辈DNS法下的CMC-Na酶活的计算公式（根据以下的实验过程应该怎么推导？），以及用哪个酶活定义（网上查到好多种，感到好迷茫> <..）。

我的实验是：菌液离心后取0.5ml上清酶液+0.5ml 0.5%CMC-Na，50℃ 30min（糖化），然后+ 2ml DNS 沸水显色10min，最后取1ml试管液+4ml水（算是稀释5倍？）混匀后测的OD值。

我的葡萄糖标准曲线是用7只试管（2ml 浓度分别为0~0.6mg/ml的糖溶液 +2ml DNS） 沸水显色10min，然后取1ml试管液+4ml水（也是稀释5倍？），测完OD值后，所得标准曲线公式为 y = 0.7081x + 0.0427（X轴是OD值，Y轴是含糖毫克数即mg/ml）R2 = 0.9964（←不知道这个R值可不可以> <..）

总之万分感谢！！
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1楼 2016-05-02 14:46:02
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
天使惠: 金币+2, ★有帮助, 感谢回答，但没有解决问题.... 2016-05-04 18:25:24
本帖内容被屏蔽
2楼2016-05-02 17:04:56
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天使惠

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Eternity宇 at 2016-05-02 17:04:56
用产物来定义比较好，你这个实验的产物生成量很好计算，各种条件不都有了吗？按照定义不就行了

我主要是在稀释那里不清楚要怎么计算...
比如说 以1ml酶液在1min内水解底物生成1微克G的酶活性来定义1个纤维素酶活单位 的话。
我现在是相当于0.5ml酶液在30min内生成Y mg糖（Y用测得的OD值减去空白的OD值后直接带入公式求出）？
酶活值= 2 * 1/30 *  Y/1000 ？
那稀释那步用在哪里了？还是说因为标准曲线的葡萄糖值也经过稀释了，所以可以无视掉？
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3楼2016-05-02 17:39:18
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