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天使惠

铁虫 (初入文坛)

[求助] 想请教DNS法测CMC-Na酶活怎么计算?【附实验过程和标准曲线值】已有1人参与

想请教下各位前辈DNS法下的CMC-Na酶活的计算公式(根据以下的实验过程应该怎么推导?),以及用哪个酶活定义(网上查到好多种,感到好迷茫> <..)。

我的实验是:菌液离心后取0.5ml上清酶液+0.5ml 0.5%CMC-Na,50℃ 30min(糖化),然后+ 2ml DNS 沸水显色10min,最后取1ml试管液+4ml水(算是稀释5倍?)混匀后测的OD值。

我的葡萄糖标准曲线是用7只试管(2ml 浓度分别为0~0.6mg/ml的糖溶液 +2ml DNS) 沸水显色10min,然后取1ml试管液+4ml水(也是稀释5倍?),测完OD值后,所得标准曲线公式为 y = 0.7081x + 0.0427(X轴是OD值,Y轴是含糖毫克数即mg/ml)R2 = 0.9964(←不知道这个R值可不可以> <..)

总之万分感谢!!
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
天使惠: 金币+2, 有帮助, 感谢回答,但没有解决问题.... 2016-05-04 18:25:24
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2楼2016-05-02 17:04:56
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天使惠

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Eternity宇 at 2016-05-02 17:04:56
用产物来定义比较好,你这个实验的产物生成量很好计算,各种条件不都有了吗?按照定义不就行了

我主要是在稀释那里不清楚要怎么计算...
比如说 以1ml酶液在1min内水解底物生成1微克G的酶活性来定义1个纤维素酶活单位 的话。
我现在是相当于0.5ml酶液在30min内生成Y mg糖(Y用测得的OD值减去空白的OD值后直接带入公式求出)?
酶活值= 2 * 1/30 *  Y/1000 ?
那稀释那步用在哪里了?还是说因为标准曲线的葡萄糖值也经过稀释了,所以可以无视掉?
3楼2016-05-02 17:39:18
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