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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 蓝白斑筛选
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兽医小博士

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蓝白斑筛选 已有1人参与

明天第一次做蓝白斑筛选 求步骤 那些地方需要注意的

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1楼 2016-04-26 22:11:30
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们实验室的方法：
1.取目的基因DNA10ul，加入到100ul的感受态细胞中，轻轻混匀，并置于冰上放置30min。
2.将感受态细胞于42 ℃水浴中热休克90s后迅速置于冰上放置2min。
3.加入800ulLB液体培养基（-AMP），37 ℃，200r/min摇菌液60min。
4.将摇菌后的转化菌液3000rpm离心3min，吸取LB液体上清液700ul弃除，留200ul液体在离心管内，轻轻吹打沉淀，然后取每组连接反应转化原液取200μl+40ul X-gal溶液+4ulIPTG溶液混匀，用无菌玻棒均匀涂布于筛选培养基上,37℃下培养半小时以上,直至液体被完全吸收。
5.倒置平板于37℃继续培养12-16小时,待出现明显而又未相互重叠的单菌落时拿出平板。放于4℃数小时,使显色完全。
6.用无菌枪头挑取白色单菌落接种于含Amp 50μg/ml的 5ml LB液体培养基中,37℃下振荡培养12小时。
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2楼2016-04-27 00:46:56
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兽医小博士

铜虫 (初入文坛)
太感谢了  请问你用的iptg浓度多少的

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3楼2016-04-27 10:45:56
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