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明天第一次做蓝白斑筛选 求步骤 那些地方需要注意的 发自小木虫Android客户端 |
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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我们实验室的方法： 1.取目的基因DNA10ul，加入到100ul的感受态细胞中，轻轻混匀，并置于冰上放置30min。 2.将感受态细胞于42 ℃水浴中热休克90s后迅速置于冰上放置2min。 3.加入800ulLB液体培养基（-AMP），37 ℃，200r/min摇菌液60min。 4.将摇菌后的转化菌液3000rpm离心3min，吸取LB液体上清液700ul弃除，留200ul液体在离心管内，轻轻吹打沉淀，然后取每组连接反应转化原液取200μl+40ul X-gal溶液+4ulIPTG溶液混匀，用无菌玻棒均匀涂布于筛选培养基上,37℃下培养半小时以上,直至液体被完全吸收。 5.倒置平板于37℃继续培养12-16小时,待出现明显而又未相互重叠的单菌落时拿出平板。放于4℃数小时,使显色完全。 6.用无菌枪头挑取白色单菌落接种于含Amp 50μg/ml的 5ml LB液体培养基中,37℃下振荡培养12小时。 |
2楼2016-04-27 00:46:56
3楼2016-04-27 10:45:56
