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基因敲除实验，急需帮助，谢谢啦！
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我已经做基因敲除试验半年了，利用质粒pUC19构建用于基因敲除的自杀质粒，抗生素抗性基因为cm，构建好重组质粒，然后进行电转，以获得同源重组菌，重复了多次，每次都能长出几个菌落，但敲除后挑单菌落摇菌用PCR扩增，能扩增出cm片段和目的片段，但是缺失片段也能扩增出，传代几次PCR结果与之相似，而且做Western blot也能检测到目的蛋白，难道cm基因插入非目标片段处，没有同源重组掉吗？请问导致这种情况的原因是啥？如何解决？非常感谢! [ Last edited by 鱼虾水中游 on 2016-4-27 at 17:25 ]@biostar2009 |
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2楼2017-06-02 10:14:35
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