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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用大肠杆菌做的标准曲线，各位大神帮忙看看我的扩增曲线为什么会出现下降？
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小魔医

新虫 (初入文坛)

[求助] 用大肠杆菌做的标准曲线，各位大神帮忙看看我的扩增曲线为什么会出现下降？ 已有1人参与

用大肠杆菌做的标准曲线，各位大神帮忙看看我的扩增曲线为什么会出现下降？

用大肠杆菌做的标准曲线，各位大神帮忙看看我的扩增曲线为什么会出现下降？
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1楼 2016-04-25 16:07:49
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许彦

木虫 (正式写手)
基线设置没有弄好。

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2楼2016-04-26 07:46:36
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小魔医

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 许彦 at 2016-04-26 07:46:36
基线设置没有弄好。

那荧光信号为什么会下降呢，按常理不是应该反应随反应时间增强的吗？

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3楼2016-04-26 09:08:19
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许彦

木虫 (正式写手)
哪里有下降，这个是基线设置问题，你把基线设置好了就可以了，

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4楼2016-04-26 10:52:19
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小魔医

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 许彦 at 2016-04-26 10:52:19
哪里有下降，这个是基线设置问题，你把基线设置好了就可以了，

这次是改变了预反应的时间，没有调整基线呀，然后就没下降了，不太懂，
用大肠杆菌做的标准曲线，各位大神帮忙看看我的扩增曲线为什么会出现下降？-1
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5楼2016-04-26 21:44:43
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小魔医

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 许彦 at 2016-04-26 10:52:19
哪里有下降，这个是基线设置问题，你把基线设置好了就可以了，

预反应时间之前是用的30S，因为试剂盒上说试剂盒内的酶预反应30S就够了，第二次的图片是用了常规的5分钟，这个会影响曲线吗？而且探针法的平台期是不是都不是很明显呀？我做的都没有别人燃料法那么明显的平台期，不好意思，问题有点多\(^o^)/~
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6楼2016-04-26 21:49:13
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许彦

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小魔医 at 2016-04-26 21:49:13
预反应时间之前是用的30S，因为试剂盒上说试剂盒内的酶预反应30S就够了，第二次的图片是用了常规的5分钟，这个会影响曲线吗？而且探针法的平台期是不是都不是很明显呀？我做的都没有别人燃料法那么明显的平台期，不 ...

可能会有影响，时间长一点，酶可能更早的开始工作了，所以前几个循环很稳定，再就是关于探针法是有平台期的，好的试剂平台期非常好看，这个一般和引物有关系。

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小魔医
7楼2016-04-27 06:06:25
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小魔医

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by 许彦 at 2016-04-27 06:06:25
可能会有影响，时间长一点，酶可能更早的开始工作了，所以前几个循环很稳定，再就是关于探针法是有平台期的，好的试剂平台期非常好看，这个一般和引物有关系。
...

意思是我这个再修改反应时间就没什么意义了，是不？那我按第二个图片的程序来做标准曲线可以吗？

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8楼2016-04-27 08:38:57
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fytz007

新虫 (正式写手)
凯杰的仪器，

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9楼2016-04-27 16:15:32
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许彦

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小魔医 at 2016-04-27 08:38:57
意思是我这个再修改反应时间就没什么意义了，是不？那我按第二个图片的程序来做标准曲线可以吗？
...

第一个也可以，把基线调整一下改到10-15就好

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10楼2016-04-27 19:28:04
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