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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接
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xcs770610

新虫 (初入文坛)

[求助] 连接 已有4人参与

把一个外源基因连到p E T28a载体上，外源基因与载体都经过了双酶切，然后胶回收，请问在连接前还需要对二者进行纯化吗？请虫友赐教

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1楼 2016-04-18 13:16:20
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惜缘之情

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
胶回收不就是纯化么？
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2楼2016-04-18 13:26:10
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xcs770610

新虫 (初入文坛)
这样能纯化干净吗

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3楼2016-04-18 13:29:59
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果你不放心可以用超薄产物纯化试剂盒一类的东西，纯化下。一般胶回收可以直接用的。
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4楼2016-04-18 15:15:23
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守望海贝

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
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5楼2016-04-18 16:36:20
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xcs770610

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-18 15:15:23
如果你不放心可以用超薄产物纯化试剂盒一类的东西，纯化下。一般胶回收可以直接用的。

好的，谢谢

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6楼2016-04-18 20:35:04
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shx0743

新虫 (正式写手)
不用，直接连就可以

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7楼2016-04-18 22:01:32
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20081118129

新虫 (著名写手)

Drake
你好！你连接上28a了吗？？我最近也在连接，连了五六次也没连接上，你是用T4连接吗？

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8楼2016-04-22 06:03:54
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

不用了吧，酶切最好过夜，之后跑胶回收就可以连接了，不需要其他纯化操作了~
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···
9楼2016-04-22 14:14:54
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 20081118129 at 2016-04-22 06:03:54
你好！你连接上28a了吗？？我最近也在连接，连了五六次也没连接上，你是用T4连接吗？

双酶切很容易的，T4连接也好，solution I连接也好，只要保证要连接的片段和载体都酶切正确，切开了就好
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···
10楼2016-04-22 14:16:29
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