| 查看: 6159 | 回复: 12 | ||
yonghui0539金虫 (初入文坛)
|
[求助]
gateway -LR反应，请知道的帮忙 已有1人参与
|
|
新手在此请教。 我用gateway，LR反应总是不成功，涂板子不长。找不到原因，在此发帖寻求帮助，多些人多些建议，先谢谢各位。 下面是我做得过程： 1. 首先拿到entry clone（这个是一个博后做的，走了）好像是合成的目的片段，然后送到公司他们做得BP反应。我拿到的还有光盘，里面都是PDF文件关于这个entry clone的，所以我觉得应该是没有问题的。我就直接扩增了entry clone，提取了质粒，酶切检测也是对的，我没有测序。 2. 我在实验室管理员那里找到了destination vector，然后也扩增了，挺好的，没有问题，然后提质粒，然后我用酶切检测质粒也是对的（实验室之前都是用这个载体，应该也不会有问题） entry clone 和目的载体都有了，我就直接LR反应了，然后问题也来了。 entry clone（100ng） 1ul destination（100ng） 2ul 酶 1ul TE 1ul 或者 entry clone（30ng） 3ul destination（120ng） 1ul 酶 1ul 反应过夜也没有长菌落，然后我就又调整体系和浓度，也不行。我看有些说明说需要线性化载体，我也酶切了，还是没有成功，做了2个星期。我觉得平板和抗生素都应该没有问题，LR反应的酶也应该没有问题，我做个阳性对照，成功了，虽然长得克隆少点。但是在12h长，最起码长了。 要是有比较好的建议请告诉我，谢谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有118人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
sunshine436
新虫 (小有名气)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 2018.5
- 散金: 120
- 红花: 2
- 帖子: 243
- 在线: 210.1小时
- 虫号: 3375590
- 注册: 2014-08-20
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2016-04-16 04:10:08
hanxiaominhu
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 126 (高中生)
- 金币: 25793.4
- 散金: 127
- 红花: 14
- 帖子: 2978
- 在线: 846.8小时
- 虫号: 1526260
- 注册: 2011-12-06
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2016-04-16 08:26:36
yonghui0539
金虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 654.8
- 散金: 30
- 帖子: 22
- 在线: 62.7小时
- 虫号: 1427868
- 注册: 2011-10-05
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2016-04-18 11:47:35
5楼2017-08-21 12:42:39
6楼2017-08-21 12:43:11
7楼2017-08-21 12:43:39
hanxiaominhu
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 126 (高中生)
- 金币: 25793.4
- 散金: 127
- 红花: 14
- 帖子: 2978
- 在线: 846.8小时
- 虫号: 1526260
- 注册: 2011-12-06
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
8楼2017-08-22 23:00:22
hanxiaominhu
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 126 (高中生)
- 金币: 25793.4
- 散金: 127
- 红花: 14
- 帖子: 2978
- 在线: 846.8小时
- 虫号: 1526260
- 注册: 2011-12-06
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
9楼2017-08-22 23:01:04
10楼2017-11-08 14:23:25
