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cys452008

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[求助] 关于DNA生物传感器已有3人参与

本人小白一个，现在老板让做DNA传感，之前实验室也没人做过，所以好多不懂的地方，自己先从比较原始的开始入手，准备在金上修饰带巯基的ss-DNA，然后用亚甲基蓝做电化学指示剂，杂交检测DNA，现在我有这样几个问题，还望各位大神不吝赐教！感激不敬！
1.修饰完成后，如果采用DPV检测的话，需要有什么步骤吗？因为我之前自己尝试的，每次DPV扫的都不一样，前一次和后一次都在变化线都不能重合，在测DPV前需要通氮除氧，或者扫个CV稳定一下吗？
2.当这组实验结束之后，电极需要洗净打磨，然后重新修饰还是有什么其他办法直接保留基地去除上面的东西？如果需要，我有一个问题，我怎么保证每次实验所得到的峰位置在一起，因为感觉，虽然修饰的量什么都是一样的，但总会有差别，我如何确保不同组实验之间数据具有可比性，因为以前做过葡萄糖过氧化氢这类的传感，这些可以直接加到缓冲液中，可以直接看到变化，但DNA杂交时间长，而且不是立即就能直观看到结果，所以我怎么确定之后的位置都在一起？
3.还有就是各位前辈在做这个的时候有什么小技巧，或需要注意的点也可以说。

真的非常感谢，自己一个人摸索真的挺痛苦的，还是希望有经验的虫友可以分不吝赐教，谢谢！@langzhizhou@louderbe

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1楼 2016-04-16 00:10:07

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【答案】应助回帖

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cys452008(langzhizhou代发): 金币+20 2016-07-26 00:28:10

1.修饰完成后，如果采用DPV检测的话，需要有什么步骤吗？因为我之前自己尝试的，每次DPV扫的都不一样，前一次和后一次都在变化线都不能重合，在测DPV前需要通氮除氧，或者扫个CV稳定一下吗？
用缓冲溶液浸泡几分钟，洗掉不牢的部分。DPV比较灵敏，不像CV那么稳定，不能重合没关系，重复测多次，根据基线取峰值然后取平均值。MB的反应应该跟氧没啥反应，不需要除氧，扫CV也不用。
2.当这组实验结束之后，电极需要洗净打磨，然后重新修饰还是有什么其他办法直接保留基地去除上面的东西？如果需要，我有一个问题，我怎么保证每次实验所得到的峰位置在一起，因为感觉，虽然修饰的量什么都是一样的，但总会有差别，我如何确保不同组实验之间数据具有可比性，因为以前做过葡萄糖过氧化氢这类的传感，这些可以直接加到缓冲液中，可以直接看到变化，但DNA杂交时间长，而且不是立即就能直观看到结果，所以我怎么确定之后的位置都在一起？
除非你做的是那种可重复利用的，比方说通过竞争等反应可以多次利用修饰后的电极，否则一般都是磨了重新修饰的。CV可以考虑峰位置在一起，DPV不太可能每次峰电位完全一样，多少有点差别，取峰值就行。你如果检测的是不同浓度的DNA，可以考虑先做低浓度的，然后同一个电极不打磨继续做高浓度的，一系列浓度做完了磨掉然后修饰再做一组。
3.还有就是各位前辈在做这个的时候有什么小技巧，或需要注意的点也可以说。
没啥技巧

，多做几个样，舍掉比较不靠谱的样，其他取平均值。这个肯定没有那种直接将MB加入溶液作媒介体的好做，电流变化小多了。