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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 扩增后 电泳图不好 怎么回事？
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wqw1212

新虫 (初入文坛)

[求助] 扩增后 电泳图不好 怎么回事？

电泳图中的 第一个为Mark  第二个是我要扩增的   我用的是胶回收产物扩增   反应体系为（25微升）：taq 0.2  （primer star HS） ，dntp  2  ，5×buffer  5   ，上  2  ，下  2，模板 0.3  ，水  13.5.  反应条件  95℃  5分钟 .95℃ 15s，58℃，30s，72℃ 1分钟，30循环，  72℃  10分钟  ，4度  保存。   跑出来的条带  很弱 （1000左右）   想知道怎么回事？   哪里不合适！  求解答

扩增后  电泳图不好  怎么回事？


@天使托 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2016-04-15 10:34:17
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wqw1212

新虫 (初入文坛)
第三个和第四个是同一个扩增片段 ，只不过模板和酶的量有差异   第四个是不是因为酶加多了？

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2楼2016-04-15 10:54:10
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wqw1212

新虫 (初入文坛)
扩增后  电泳图不好  怎么回事？-1

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3楼2016-04-15 10:54:52
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nnnnnnnnnn
4楼2016-04-15 16:03:45
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tuhangul622

金虫 (小有名气)
你这个是怎么得来的反应体系，感觉各试剂的比例没太把握好

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人的一生可以没有荣誉和鲜花，可不能没有自尊！
5楼2016-04-16 01:37:04
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solomon7811

新虫 (小有名气)
有些没看明白，目标产物大概是多大？第2，3泳道感觉产物不一样啊。另外引物终浓度是多少？模板是怎么提的？看这个样子感觉要么模板没提好或要么就是如楼上所说PCR体系没配好

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6楼2016-04-16 08:43:08
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Cathering_w

新虫 (正式写手)
primer star HS会有这样结果的，引物加的有点多

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博士终于毕业了，未来还有什么困难能难得倒我呢！加油我得未来。
7楼2016-04-16 09:47:36
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wqw1212

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by nnnnnnnnnn at 2016-04-15 16:03:45

怎么了？

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8楼2016-04-16 11:18:15
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wqw1212

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by tuhangul622 at 2016-04-16 01:37:04
你这个是怎么得来的反应体系，感觉各试剂的比例没太把握好

因为根据说明书加的吧

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9楼2016-04-16 11:18:47
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wqw1212

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by solomon7811 at 2016-04-16 08:43:08
有些没看明白，目标产物大概是多大？第2，3泳道感觉产物不一样啊。另外引物终浓度是多少？模板是怎么提的？看这个样子感觉要么模板没提好或要么就是如楼上所说PCR体系没配好
...

第二  第三泳道是扩增不同的基因，  第二个是以胶回收产物为模板，亮的那个条带是目的条带，第三 第四是扩增同一个基因

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10楼2016-04-16 11:20:46
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