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怎样测定该物质是木瓜蛋白酶？ 发自小木虫Android客户端 |
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york6999
木虫之王 (知名作家)
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【答案】应助回帖
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木瓜蛋白酶能使N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（底物）水解而释出N-苯甲酰-L-精氨酸，其释出量可用氢氧化钠液滴定，以此确定酶活力。 酶活单位 在25℃下，每分钟内能催化分解1umol底物的酶量，称为1单位。 试液制备 1、底物溶液：准确称取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐1.42g，加10mmol/LEDTA、50mmol/L半胱氨酸液2.6mL，加适量水，用0.1mol/L氢氧化钠液调节pH至6.2，最后定容至50.0mL。 2、待测酶液：取试样用水稀释至适当浓度，并调节至pH6.2。 测定方法 25℃恒温条件下，取25mL烧杯装在pH自动滴定仪上，加底物溶液3.75mL、3mol/L氯化钠溶液2.50mL、重蒸馏水1.25mL，混合后加入待测酶液后立即计时，用0.1mol/L氢氧化钠在电磁搅拌下连续滴定以保持pH6.2，记下每分钟所耗0.01mol/L氢氧化钠毫升数。同时进行空白校正。按下式计算木瓜蛋白酶的活力P（单位/mg）： P =C·ΔV·1000/W 式中：c：氢氧化钠液的浓度，mol/L；ΔV：每分钟消耗氢氧化钠液的体积减去空白值；W：反应液中木瓜蛋白酶的质量，mg。 |
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