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怎样测定该物质是木瓜蛋白酶? 发自小木虫Android客户端 |
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york6999
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木瓜蛋白酶能使N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(底物)水解而释出N-苯甲酰-L-精氨酸,其释出量可用氢氧化钠液滴定,以此确定酶活力。 酶活单位 在25℃下,每分钟内能催化分解1umol底物的酶量,称为1单位。 试液制备 1、底物溶液:准确称取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐1.42g,加10mmol/LEDTA、50mmol/L半胱氨酸液2.6mL,加适量水,用0.1mol/L氢氧化钠液调节pH至6.2,最后定容至50.0mL。 2、待测酶液:取试样用水稀释至适当浓度,并调节至pH6.2。 测定方法 25℃恒温条件下,取25mL烧杯装在pH自动滴定仪上,加底物溶液3.75mL、3mol/L氯化钠溶液2.50mL、重蒸馏水1.25mL,混合后加入待测酶液后立即计时,用0.1mol/L氢氧化钠在电磁搅拌下连续滴定以保持pH6.2,记下每分钟所耗0.01mol/L氢氧化钠毫升数。同时进行空白校正。按下式计算木瓜蛋白酶的活力P(单位/mg): P =C·ΔV·1000/W 式中:c:氢氧化钠液的浓度,mol/L;ΔV:每分钟消耗氢氧化钠液的体积减去空白值;W:反应液中木瓜蛋白酶的质量,mg。 |
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