24小时热门版块排行榜    

查看: 702  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

李保磊

金虫 (著名写手)

[求助] 需要你们的帮助,拜托了 已有1人参与

问下如何从一宿主细胞通过PCR的方法扩增未知序列的基因(已知功能)?需要具体的步骤,越详细越好,拜托了
(最好从突变株出发,其它方法也行)

@wizardfan @biostar2009 @飞约疯人院 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

做最棒的自己!!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小东Victoria

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 李保磊 at 2016-04-14 19:57:00
一共想到2方法,一个就是和你的差不多,我们觉得可能有点费时,而且得到的是不是序列一部分,所以……老师给我们的提示是突变株,什么质粒,PCr,大肠杆菌之类的,我们也不知道怎么做,所以向大神们请教下
...

抱歉,很久没登录了,如果是突变株的话就更好办了,直接找到原基因序列,设计特异性引物,然后以你的样品DNA为模板,进行pcr扩增就行了,得到的序列插入到大肠杆菌的T3载体,再扩增一下,提质粒测序就可以了。

发自小木虫Android客户端
5楼2016-04-25 16:11:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

小东Victoria

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
去ncbi查找几种不同物种已知的同源基因的序列,然后根据已知同源基因序列设计一对或几对兼并性引物。采用兼并引物扩增得到一段或者几段序列,将得到pcr片段测序,与之前的同源基因比对,看看是否是你需要的那个基因。如果是,在设计特异性引物,扩增3'和5‘端;如果不是,再重新设计一对兼并性引物,重复以上试验,直至得到你需要的序列。你从网上搜一下,兼并性引物设计规则,以及3',5’端扩增方法。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2016-04-14 13:15:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李保磊

金虫 (著名写手)

一共想到2方法,一个就是和你的差不多,我们觉得可能有点费时,而且得到的是不是序列一部分,所以……老师给我们的提示是突变株,什么质粒,PCr,大肠杆菌之类的,我们也不知道怎么做,所以向大神们请教下

发自小木虫Android客户端
做最棒的自己!!
3楼2016-04-14 19:56:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李保磊

金虫 (著名写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小东Victoria at 2016-04-14 13:15:32
去ncbi查找几种不同物种已知的同源基因的序列,然后根据已知同源基因序列设计一对或几对兼并性引物。采用兼并引物扩增得到一段或者几段序列,将得到pcr片段测序,与之前的同源基因比对,看看是否是你需要的那个基因 ...

一共想到2方法,一个就是和你的差不多,我们觉得可能有点费时,而且得到的是不是序列一部分,所以……老师给我们的提示是突变株,什么质粒,PCr,大肠杆菌之类的,我们也不知道怎么做,所以向大神们请教下

发自小木虫Android客户端
做最棒的自己!!
4楼2016-04-14 19:57:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +9 yufeiwaner 2026-08-09 9/450 2026-08-10 12:25 by 流流伤
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +4 家与远方 2026-08-10 6/300 2026-08-10 12:09 by 家与远方
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +12 Lanmanbaby 2026-08-09 20/1000 2026-08-10 11:51 by 要乐观耀哥
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +5 瞬息宇宙 2026-08-10 6/300 2026-08-10 10:38 by Tide man
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +15 且听虎啸 2026-08-07 22/1100 2026-08-09 22:13 by 布布和一二
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 5/250 2026-08-08 21:54 by 13586093586
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
请填处理意见