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李保磊

金虫 (著名写手)

[求助] 需要你们的帮助,拜托了 已有1人参与

问下如何从一宿主细胞通过PCR的方法扩增未知序列的基因(已知功能)?需要具体的步骤,越详细越好,拜托了
(最好从突变株出发,其它方法也行)

@wizardfan @biostar2009 @飞约疯人院 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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小东Victoria

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 李保磊 at 2016-04-14 19:57:00
一共想到2方法,一个就是和你的差不多,我们觉得可能有点费时,而且得到的是不是序列一部分,所以……老师给我们的提示是突变株,什么质粒,PCr,大肠杆菌之类的,我们也不知道怎么做,所以向大神们请教下
...

抱歉,很久没登录了,如果是突变株的话就更好办了,直接找到原基因序列,设计特异性引物,然后以你的样品DNA为模板,进行pcr扩增就行了,得到的序列插入到大肠杆菌的T3载体,再扩增一下,提质粒测序就可以了。

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5楼2016-04-25 16:11:20
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小东Victoria

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
去ncbi查找几种不同物种已知的同源基因的序列,然后根据已知同源基因序列设计一对或几对兼并性引物。采用兼并引物扩增得到一段或者几段序列,将得到pcr片段测序,与之前的同源基因比对,看看是否是你需要的那个基因。如果是,在设计特异性引物,扩增3'和5‘端;如果不是,再重新设计一对兼并性引物,重复以上试验,直至得到你需要的序列。你从网上搜一下,兼并性引物设计规则,以及3',5’端扩增方法。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2016-04-14 13:15:32
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李保磊

金虫 (著名写手)

一共想到2方法,一个就是和你的差不多,我们觉得可能有点费时,而且得到的是不是序列一部分,所以……老师给我们的提示是突变株,什么质粒,PCr,大肠杆菌之类的,我们也不知道怎么做,所以向大神们请教下

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3楼2016-04-14 19:56:36
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李保磊

金虫 (著名写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小东Victoria at 2016-04-14 13:15:32
去ncbi查找几种不同物种已知的同源基因的序列,然后根据已知同源基因序列设计一对或几对兼并性引物。采用兼并引物扩增得到一段或者几段序列,将得到pcr片段测序,与之前的同源基因比对,看看是否是你需要的那个基因 ...

一共想到2方法,一个就是和你的差不多,我们觉得可能有点费时,而且得到的是不是序列一部分,所以……老师给我们的提示是突变株,什么质粒,PCr,大肠杆菌之类的,我们也不知道怎么做,所以向大神们请教下

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4楼2016-04-14 19:57:00
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