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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 需要你们的帮助，拜托了
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李保磊

金虫 (著名写手)

[求助] 需要你们的帮助，拜托了 已有1人参与

问下如何从一宿主细胞通过PCR的方法扩增未知序列的基因(已知功能)？需要具体的步骤，越详细越好，拜托了
（最好从突变株出发，其它方法也行）

@wizardfan @biostar2009 @飞约疯人院 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-04-13 18:33:00
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小东Victoria

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 李保磊 at 2016-04-14 19:57:00
一共想到2方法，一个就是和你的差不多，我们觉得可能有点费时，而且得到的是不是序列一部分，所以……老师给我们的提示是突变株，什么质粒，PCr，大肠杆菌之类的，我们也不知道怎么做，所以向大神们请教下
...

抱歉，很久没登录了，如果是突变株的话就更好办了，直接找到原基因序列，设计特异性引物，然后以你的样品DNA为模板，进行pcr扩增就行了，得到的序列插入到大肠杆菌的T3载体，再扩增一下，提质粒测序就可以了。

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5楼2016-04-25 16:11:20
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小东Victoria

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
去ncbi查找几种不同物种已知的同源基因的序列，然后根据已知同源基因序列设计一对或几对兼并性引物。采用兼并引物扩增得到一段或者几段序列，将得到pcr片段测序，与之前的同源基因比对，看看是否是你需要的那个基因。如果是，在设计特异性引物，扩增3'和5‘端；如果不是，再重新设计一对兼并性引物，重复以上试验，直至得到你需要的序列。你从网上搜一下，兼并性引物设计规则，以及3'，5’端扩增方法。
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李保磊
2楼2016-04-14 13:15:32
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李保磊

金虫 (著名写手)
一共想到2方法，一个就是和你的差不多，我们觉得可能有点费时，而且得到的是不是序列一部分，所以……老师给我们的提示是突变株，什么质粒，PCr，大肠杆菌之类的，我们也不知道怎么做，所以向大神们请教下

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3楼2016-04-14 19:56:36
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李保磊

金虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小东Victoria at 2016-04-14 13:15:32
去ncbi查找几种不同物种已知的同源基因的序列，然后根据已知同源基因序列设计一对或几对兼并性引物。采用兼并引物扩增得到一段或者几段序列，将得到pcr片段测序，与之前的同源基因比对，看看是否是你需要的那个基因 ...

一共想到2方法，一个就是和你的差不多，我们觉得可能有点费时，而且得到的是不是序列一部分，所以……老师给我们的提示是突变株，什么质粒，PCr，大肠杆菌之类的，我们也不知道怎么做，所以向大神们请教下

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4楼2016-04-14 19:57:00
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