应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 需要你们的帮助，拜托了
61/1返回列表
查看: 697  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

李保磊

金虫 (著名写手)

[求助] 需要你们的帮助，拜托了 已有1人参与

问下如何从一宿主细胞通过PCR的方法扩增未知序列的基因(已知功能)？需要具体的步骤，越详细越好，拜托了
（最好从突变株出发，其它方法也行）

@wizardfan @biostar2009 @飞约疯人院 @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
做最棒的自己！！
1楼 2016-04-13 18:33:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小东Victoria

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
去ncbi查找几种不同物种已知的同源基因的序列，然后根据已知同源基因序列设计一对或几对兼并性引物。采用兼并引物扩增得到一段或者几段序列，将得到pcr片段测序，与之前的同源基因比对，看看是否是你需要的那个基因。如果是，在设计特异性引物，扩增3'和5‘端；如果不是，再重新设计一对兼并性引物，重复以上试验，直至得到你需要的序列。你从网上搜一下，兼并性引物设计规则，以及3'，5’端扩增方法。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

李保磊
2楼2016-04-14 13:15:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李保磊

金虫 (著名写手)
一共想到2方法，一个就是和你的差不多，我们觉得可能有点费时，而且得到的是不是序列一部分，所以……老师给我们的提示是突变株，什么质粒，PCr，大肠杆菌之类的，我们也不知道怎么做，所以向大神们请教下

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
做最棒的自己！！
3楼2016-04-14 19:56:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李保磊

金虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小东Victoria at 2016-04-14 13:15:32
去ncbi查找几种不同物种已知的同源基因的序列，然后根据已知同源基因序列设计一对或几对兼并性引物。采用兼并引物扩增得到一段或者几段序列，将得到pcr片段测序，与之前的同源基因比对，看看是否是你需要的那个基因 ...

一共想到2方法，一个就是和你的差不多，我们觉得可能有点费时，而且得到的是不是序列一部分，所以……老师给我们的提示是突变株，什么质粒，PCr，大肠杆菌之类的，我们也不知道怎么做，所以向大神们请教下

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
做最棒的自己！！
4楼2016-04-14 19:57:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小东Victoria

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 李保磊 at 2016-04-14 19:57:00
一共想到2方法，一个就是和你的差不多，我们觉得可能有点费时，而且得到的是不是序列一部分，所以……老师给我们的提示是突变株，什么质粒，PCr，大肠杆菌之类的，我们也不知道怎么做，所以向大神们请教下
...

抱歉，很久没登录了，如果是突变株的话就更好办了，直接找到原基因序列，设计特异性引物，然后以你的样品DNA为模板，进行pcr扩增就行了，得到的序列插入到大肠杆菌的T3载体，再扩增一下，提质粒测序就可以了。

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2016-04-25 16:11:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李保磊

金虫 (著名写手)
知道了，谢谢你，应该就是这个方法，谢谢

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
做最棒的自己！！
6楼2016-04-26 12:42:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 李保磊 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +11 且听虎啸 2026-08-07 14/700 2026-08-08 12:50 by 布布和一二
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +4 a089 2026-08-07 4/200 2026-08-08 12:15 by arzu_hma
[找工作] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 10:39 by 3OOjAIS77qg2
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 10:19 by 3OOjAIS77qg2
[基金申请] fileCode有新解读？ +8 Tide man 2026-08-08 16/800 2026-08-08 09:59 by Tide man
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 08:59 by 6vVgjDL4CnGu
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 08:27 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 4/200 2026-08-08 08:21 by 6vVgjDL4CnGu
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:47 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭