应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒求助
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 1365  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒求助 已有3人参与

我的目的片段是500左右，用的是pET-32a和pGEX-4T-1两种质粒。分别用双酶切切开后（存放在-20冰箱），酶切位点是EcoR1和BamH1，用T4连接酶过夜连接，可是要不就是不长菌落，要不就是假阳性克隆。     
是没切开？
还是没连上？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-04-10 15:35:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
切没切开不是得跑电泳看看么？然后回收符合要求的条带（切下胶块或者回收产物放-20）再连接呀。
赞一下 回复此楼
2楼2016-04-11 08:36:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hlxxym

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请问你在酶切后是否有做切胶回收？如果没有的话，可能是发生了自连。
赞一下 回复此楼
3楼2016-04-11 12:45:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小研来报到

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切位点EcoR1和BamH1离得太近了
赞一下 回复此楼
4楼2016-04-11 15:22:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)
楼上正解，楼主PET32A的空载质粒能送我些吗?邮费我出，我给你打钱过去。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
5楼2016-04-11 15:40:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hlxxym at 2016-04-11 12:45:57
请问你在酶切后是否有做切胶回收？如果没有的话，可能是发生了自连。

双酶切后，跑胶都有条带，而且都做了切胶回收。
赞一下 回复此楼
6楼2016-04-11 21:28:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-11 08:36:56
切没切开不是得跑电泳看看么？然后回收符合要求的条带（切下胶块或者回收产物放-20）再连接呀。

我用回收纯化的cDNA双酶切，跑电泳有条带，但是不能看出来切开了啊。。
赞一下 回复此楼
7楼2016-04-11 21:30:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小研来报到 at 2016-04-11 15:22:20
酶切位点EcoR1和BamH1离得太近了

这个离得近影响真的会很大么？我看好多也有用这两个酶切位点的。。
赞一下 回复此楼
8楼2016-04-11 21:31:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hlxxym at 2016-04-11 12:45:57
请问你在酶切后是否有做切胶回收？如果没有的话，可能是发生了自连。

我现在重新做了一次，酶切之后，就连接了，也不知道结果怎么样
赞一下 回复此楼
9楼2016-04-12 14:20:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小研来报到 at 2016-04-11 15:22:20
酶切位点EcoR1和BamH1离得太近了

如果，我分两次切可以么？
啊啊啊啊啊啊，难道又要重新换别的酶切位点做了么。。。
赞一下 回复此楼
10楼2016-04-12 14:22:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 凯伦爱佳佳 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 298分 070300求调剂 +8 zwen03 2026-04-02 8/400 2026-04-02 21:55 by barlinike
[考研] 一志愿复旦材料，英一专硕，总分357调剂 +4 1050389037 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:40 by dongzh2009
[考研] 材料340分调剂 +7 夏夜晚风_long 2026-04-02 9/450 2026-04-02 21:20 by dongzh2009
[考研] 342求调剂 +16 Mary Keen 2026-03-28 17/850 2026-04-02 21:14 by 690616278
[考研] 环境工程297分求调剂一志愿杭高院 +15 GENJIOW 2026-03-31 16/800 2026-04-02 17:56 by cyh—315
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +9 双马尾痞老板2 2026-04-01 9/450 2026-04-02 12:14 by oooqiao
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +10 哇呼哼呼哼 2026-04-01 11/550 2026-04-02 11:31 by lnilvy
[考研] 271求调剂 +15 勒布朗@ 2026-03-31 20/1000 2026-04-02 11:24 by Sammy2
[考研] 289求调剂 +23 新时代材料 2026-03-27 26/1300 2026-04-02 10:29 by oooqiao
[考研] 土木304求调剂 +6 兔突突突， 2026-03-31 7/350 2026-04-02 09:06 by coolminer
[考研] 291求调剂 +20 Y-cap 2026-03-29 25/1250 2026-04-01 23:49 by 欣喜777
[考研] 310分求调剂 +4 成功上岸wang 2026-04-01 4/200 2026-04-01 20:35 by liu823948201
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-30 16/800 2026-04-01 17:58 by 邱gl
[考研] 求调剂 +4 图鉴212 2026-03-30 5/250 2026-04-01 15:32 by 图鉴212
[考研] 318求调剂 +8 七忆77 2026-04-01 8/400 2026-04-01 10:37 by Jaylen.
[考研] 求0861交通运输专硕or材料专硕调剂 +4 勒布朗@ 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:54 by 一只好果子?
[考研] 一志愿中海洋材料357 +4 麦恩莉. 2026-03-30 4/200 2026-03-31 14:35 by 记事本2026
[考研] 本科211生物医学工程085409求调剂339分 +7 里子木yy 2026-03-29 7/350 2026-03-31 14:35 by fmesaito
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等调剂 +8 哇呼哼呼哼 2026-03-27 10/500 2026-03-31 13:35 by Huaxue_Wang
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +12 芋泥小铃铛 2026-03-28 12/600 2026-03-30 17:06 by wangjy2002
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭