应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒求助
121/2返回列表12下一页
查看: 1518  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒求助 已有3人参与

我的目的片段是500左右，用的是pET-32a和pGEX-4T-1两种质粒。分别用双酶切切开后（存放在-20冰箱），酶切位点是EcoR1和BamH1，用T4连接酶过夜连接，可是要不就是不长菌落，要不就是假阳性克隆。     
是没切开？
还是没连上？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-04-10 15:35:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
切没切开不是得跑电泳看看么？然后回收符合要求的条带（切下胶块或者回收产物放-20）再连接呀。
赞一下 回复此楼
2楼2016-04-11 08:36:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hlxxym

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请问你在酶切后是否有做切胶回收？如果没有的话，可能是发生了自连。
赞一下 回复此楼
3楼2016-04-11 12:45:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小研来报到

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切位点EcoR1和BamH1离得太近了
赞一下 回复此楼
4楼2016-04-11 15:22:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)
楼上正解，楼主PET32A的空载质粒能送我些吗?邮费我出，我给你打钱过去。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
5楼2016-04-11 15:40:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hlxxym at 2016-04-11 12:45:57
请问你在酶切后是否有做切胶回收？如果没有的话，可能是发生了自连。

双酶切后，跑胶都有条带，而且都做了切胶回收。
赞一下 回复此楼
6楼2016-04-11 21:28:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-11 08:36:56
切没切开不是得跑电泳看看么？然后回收符合要求的条带（切下胶块或者回收产物放-20）再连接呀。

我用回收纯化的cDNA双酶切，跑电泳有条带，但是不能看出来切开了啊。。
赞一下 回复此楼
7楼2016-04-11 21:30:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小研来报到 at 2016-04-11 15:22:20
酶切位点EcoR1和BamH1离得太近了

这个离得近影响真的会很大么？我看好多也有用这两个酶切位点的。。
赞一下 回复此楼
8楼2016-04-11 21:31:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hlxxym at 2016-04-11 12:45:57
请问你在酶切后是否有做切胶回收？如果没有的话，可能是发生了自连。

我现在重新做了一次，酶切之后，就连接了，也不知道结果怎么样
赞一下 回复此楼
9楼2016-04-12 14:20:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小研来报到 at 2016-04-11 15:22:20
酶切位点EcoR1和BamH1离得太近了

如果，我分两次切可以么？
啊啊啊啊啊啊，难道又要重新换别的酶切位点做了么。。。
赞一下 回复此楼
10楼2016-04-12 14:22:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 凯伦爱佳佳 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭