| 查看: 355 | 回复: 4 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 sunmaocai 的 5 个金币 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
郁闷中 求助
|
|||
| 我pcr，现在只能跑出模板，跑过梯度还是跑不出来，为什么啊？模板是没问题的，做过测序了 |
回复此楼» 猜你喜欢
估计是周四
已经有3人回复
-
基金啊基金
已经有3人回复
-
科研孤儿太难了
已经有15人回复
-
让我中一个面上吧！
已经有10人回复
-
言之凿凿，明天官网会通知放榜？
已经有17人回复
-
时间戳又变了
已经有17人回复
-
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有11人回复
-
时间戳变了，能看出什么问题？
已经有23人回复
-
只有每年这种时候来逛逛小木虫
已经有22人回复
-
放榜前的不淡定
已经有12人回复
shs304
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3143
- 帖子: 323
- 在线: 63.7小时
- 虫号: 588733
- 注册: 2008-08-29
- 性别: GG
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
3楼2008-10-23 15:42:22
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
2楼2008-10-23 15:38:41
4楼2008-10-23 15:53:07
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
|
首先，建议预变性时间再长一点试试看 比如10min 退火温度最好是73→53往下降而不是往上升，退火温度的最低点至少比软件算的Tm再减5度。另外，73度我觉得是没什么意义的，还不如从65甚至60度开始往下降，每降1个循环2~3次，到53（假设是53）在循环多一些 一般来说退火时间30s是足够的，但我试过需要退火40s左右，可能跟我的引物CG比太低有关 buffer是Mg2+ free的？一般来说不用再另外加镁，除非是buffer里头没有。有时候，Mg太高是不利于PCR的，我试过~~会出现一大片smear，错误率也高 酶的话，建议用好一点的酶 反正我用Takara的Ex Taq做不出来的，用Invitrogen的白金高保真Taq就做出来了，不过价格相差五六倍……但实验能做出来也值了 一个50ul体系，一般用1单位酶，20ul的话就按照比例减少。你看看这里的酶会不会不适 一般的Taq的聚合速度是1kb/min，你要扩1300，保险一点最好延伸1.5min。你这里的延伸时间有点短，除非你用的是高速的酶 根据以上几点再试试看能不能做出来 |
5楼2008-10-23 18:52:32
40