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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » GFP腺病毒感染细胞后子代细胞还带绿色荧光吗？
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] GFP腺病毒感染细胞后子代细胞还带绿色荧光吗？ 已有1人参与

请教各位虫友一个问题，想用GFP腺病毒感染细胞用于标记细胞，不知道子代细胞是否还具有绿色荧光。想将不同细胞共培养后用流式细胞仪分选，之前试过核荧光染料，效果不好，不知道虫友还有其他好的标记方法推荐不？谢谢！
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实验，实验，还是实验！
1楼 2016-04-09 14:40:26
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
4楼2016-04-11 23:16:47
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ken19860823

木虫 (正式写手)
你说的子代应该是传代后的细胞吧。病毒整合到基因组就会稳定表达gfp，瞬时表达几代传代就丢失了。你应该除了gfp外还需要一个筛选基因如puro，要药杀几代后都带绿色荧光后基本就是整合到基因组了。你不筛选，传几代百分之99以上都是不带gfp得了，你怎么用流式呢。

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做基因修饰的老菜鸡
2楼2016-04-09 18:48:49
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-04-09 18:48:49
你说的子代应该是传代后的细胞吧。病毒整合到基因组就会稳定表达gfp，瞬时表达几代传代就丢失了。你应该除了gfp外还需要一个筛选基因如puro，要药杀几代后都带绿色荧光后基本就是整合到基因组了。你不筛选，传几代百 ...

我用腺病毒的目的就是短期标记用的，将A细胞标记完与B细胞共培养几天后再用流式细胞仪基于绿色荧光分选收集不带荧光的B细胞。慢病毒可以做稳转，但是慢病毒据说感染率不高，而且我做的是原代细胞，不适合多次传代筛稳转株。我的目的是标记，所以想用感染率高的腺病毒，但是由于腺病毒不整合到基因组，又怕感染后细胞培养过程中产生的子代细胞不带GFP，使得分离出来的细胞不纯。
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实验，实验，还是实验！
3楼2016-04-09 20:07:52
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ghqiu09 at 2016-04-11 23:16:47
可以的，如果不确定有条件可以上荧光显微镜或者流式看一看。腺病毒不清楚，我们实验室用慢病毒，10d内没问题

谢谢，慢病毒因为整合到基因组，所以理论上是可以永久标记，但是标记率可能不太高，我希望标记率高一些，接近百分百，所以选择腺病毒，但是腺病毒只在胞浆内，所以担心标记后细胞增殖产生子代细胞不带荧光。
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实验，实验，还是实验！
5楼2016-04-12 09:12:37
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