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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)

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[求助] 植物miRNA qRT-PCR内参已有1人参与

我最近要用 qRT-PCR来验证植物miRNA 的测序结果，但实验做下来发现U6内参好像不太适合（u6在WT中的ct值是20，而在突变体中是24），用5s做内参的话（5s在WT中的ct值是12，而在突变体中是13），感觉这两个内参都不太适合，大家有什么好的建议吗？

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1楼 2016-04-07 19:37:20

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hlxxym

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

因为不知道你的实验背景，我就按我的理解来回答了，说错勿怪。

我猜测你是先对不同处理组的植物进行miRNA高通量测序，现在要用RT-PCR来验证测序结果。现在碰到的问题是没有合适的内参。那么，我建议你不妨从测序结果入手，挑选在各处理组中测序结果均表现出稳定表达的miRNA来作为内参。当然，稳妥起见，最好挑选3-5个，做RT-PCR后，用软件分析比较其稳定性。

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