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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问一下大家酵母pcr时加多少量
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絮燕菲菲

新虫 (小有名气)

[求助] 请问一下大家酵母pcr时加多少量 已有1人参与

我用的是premix taq 酶，这个p时体系配制是多少？请求大家帮忙了，做了三次没做出来，都出来了引物二聚体。。。

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1楼 2016-04-07 00:11:31
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未老的黄

铁虫 (小有名气)
你这个问题提的，没说清楚啊…是菌落p还是染色体啊

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2楼2016-04-07 00:35:15
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絮燕菲菲

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 未老的黄 at 2016-04-07 00:35:15
你这个问题提的，没说清楚啊…是菌落p还是染色体啊

呀。。。是哦，是基因组pcr不好意思

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3楼2016-04-07 09:29:17
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的基因组是试剂盒抽提的？还是机械破碎菌体后进行pcr的呢？引物的退火温度多少？是否有过优化摸索？你pcr反应体系是多大，模板又加了多少呢？

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
4楼2016-04-07 18:21:11
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絮燕菲菲

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-04-07 18:21:11
你的基因组是试剂盒抽提的？还是机械破碎菌体后进行pcr的呢？引物的退火温度多少？是否有过优化摸索？你pcr反应体系是多大，模板又加了多少呢？

额。。。。
试剂盒提的，我只想知道建立50微升的体系该加多少酵母基因组DNA，你问的其他问题目前正是急需解决的，
提出来测了od值，在25ng/ul左右。

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5楼2016-04-07 23:57:22
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
mix酶保真性不够高，你扩出来之后，还有下一步用途的话，建议你用高保真酶。然后是你说的pcr问题，我们一般用25微升体系，基本上都可以跑出来的，模版加1

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6楼2016-04-10 09:01:40
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