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絮燕菲菲

新虫 (小有名气)

[求助] 请问一下大家酵母pcr时加多少量 已有1人参与

我用的是premix taq 酶,这个p时体系配制是多少?请求大家帮忙了,做了三次没做出来,都出来了引物二聚体。。。

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未老的黄

铁虫 (小有名气)

你这个问题提的,没说清楚啊…是菌落p还是染色体啊

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2楼2016-04-07 00:35:15
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絮燕菲菲

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 未老的黄 at 2016-04-07 00:35:15
你这个问题提的,没说清楚啊…是菌落p还是染色体啊

呀。。。是哦,是基因组pcr不好意思

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3楼2016-04-07 09:29:17
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的基因组是试剂盒抽提的?还是机械破碎菌体后进行pcr的呢?引物的退火温度多少?是否有过优化摸索?你pcr反应体系是多大,模板又加了多少呢?

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
4楼2016-04-07 18:21:11
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絮燕菲菲

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-04-07 18:21:11
你的基因组是试剂盒抽提的?还是机械破碎菌体后进行pcr的呢?引物的退火温度多少?是否有过优化摸索?你pcr反应体系是多大,模板又加了多少呢?

额。。。。
试剂盒提的,我只想知道建立50微升的体系该加多少酵母基因组DNA,你问的其他问题目前正是急需解决的,
提出来测了od值,在25ng/ul左右。

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5楼2016-04-07 23:57:22
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)

mix酶保真性不够高,你扩出来之后,还有下一步用途的话,建议你用高保真酶。然后是你说的pcr问题,我们一般用25微升体系,基本上都可以跑出来的,模版加1

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6楼2016-04-10 09:01:40
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