| 查看: 7432 | 回复: 49 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
毕赤酵母表达抗菌肽，做了几十次了，一直不表达
|
||||
|
本人是做毕赤酵母表达抗菌肽的新手，从开始什么都不知道，到现在碰到各种问题，试验操作上一些问题还可以看看论坛解决，但是这种表达不出来就不知道怎么解决了。 目的蛋白已经在大肠杆菌成功表达，在毕赤酵母做了几十次了，菌落PCR鉴定是阳性，诱导表达还是不表达，现在已经没有做实验的激情了！！！ 先说下自己试验步骤吧： 1、构建载体，测序鉴定正确 2、线性化载体，乙醇沉淀回收、凝胶回收、DNA纯化试剂盒回收都做过。 3、X33感受态制备 4、电击：电压2000V，电容25uF，电阻200，时间2 5、加山梨醇28度静置1h，涂抗生素终浓度100的YPDS平板 6、培养2、3天只能长个位数的转化子，效率太低了，自己也尝试过提高DNA浓度，但是还是效率低 7、挑单菌落划抗性平板，长出菌落后再做菌落PCR 8、鉴定阳性就BMGY/BMMY培养诱导，甲醇浓度1%。 9、SDS-PAGE鉴定上清和沉淀 10、结果NOTHING!!!!! 问题：1怎么提高转化效率；2怎么改进鉴定是否表达   IMG_20160329_202711.jpg |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 质粒表达 |
» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有91人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于用酵母表达的设计引物问题
已经有0人回复
- 生物技术各种实验protocol征集
已经有55人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
武汉征男友
+1/286
-
山东建筑大学材料类研究生招生调剂
+3/236
-
澳门科技大学创新工程学院诚招博士生
+2/136
-
马尔文激光粒度+纳米粒径Zeta电位测试原始数据与Origin绘图V131/2039/8821
+1/91
-
江南大学招收具有3年海外博后经历的青年教师
+1/80
-
资源与环境专硕
+1/73
-
重庆交通大学院士团队招收材料、能源动力专业硕士研究生
+2/56
-
青岛大学固态电池研究团队招收材料、化学、物理等方向博士研究生
+2/52
-
球差相关知识
+1/40
-
【实战型】【生物医药】2026青岛大学招博士生 含少数民族骨干计划2名！
+1/17
-
【实战型】【生物医药】2026青岛大学招博士生 含少数民族骨干计划2名！
+1/15
-
广东唯一石化院校——资源与环境专硕招生
+1/13
-
中南大学喻桂朋教授团队新增2026年博士研究生
+1/11
-
欢迎各位同学申请参加澳门大学健康科学学院的2026年夏令营，报名截止4月12号
+1/6
-
【博士招生】天津理工大学国家杰青王铁课题组招收2026年博士研究生
+1/3
-
【博士招生】天津理工大学国家杰青王铁课题组招收2026年博士研究生
+1/2
-
南昌航空大学拟招收飞行器设计或计算空气动力学研究方向博士生 1名
+1/2
-
北京高校副校长团队招收机械类，环境类学硕和专硕
+1/2
-
【科研干货】纳米抗体凭什么成为实验室“新宠”？附优质制备服务商参考
+1/1
-
中国人民大学物理学系蔡鹏课题组招收优秀硕士博士研究生
+1/1
48楼2018-03-22 10:09:43
3楼2016-04-01 16:37:39
4楼2016-04-01 17:08:29
5楼2016-04-01 19:21:35
简单回复
冷雁孤旅2楼
2016-04-01 16:36
回复
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
qi 发自小木虫Android客户端
两脚泥day6楼
2016-04-01 19:44
回复
YX要努力7楼
2016-04-01 20:01
回复
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫Android客户端
阿尔法XMC12楼
2016-04-04 12:09
回复
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
