| 查看: 6955 | 回复: 49 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
毕赤酵母表达抗菌肽，做了几十次了，一直不表达
|
||||
|
本人是做毕赤酵母表达抗菌肽的新手，从开始什么都不知道，到现在碰到各种问题，试验操作上一些问题还可以看看论坛解决，但是这种表达不出来就不知道怎么解决了。 目的蛋白已经在大肠杆菌成功表达，在毕赤酵母做了几十次了，菌落PCR鉴定是阳性，诱导表达还是不表达，现在已经没有做实验的激情了！！！ 先说下自己试验步骤吧： 1、构建载体，测序鉴定正确 2、线性化载体，乙醇沉淀回收、凝胶回收、DNA纯化试剂盒回收都做过。 3、X33感受态制备 4、电击：电压2000V，电容25uF，电阻200，时间2 5、加山梨醇28度静置1h，涂抗生素终浓度100的YPDS平板 6、培养2、3天只能长个位数的转化子，效率太低了，自己也尝试过提高DNA浓度，但是还是效率低 7、挑单菌落划抗性平板，长出菌落后再做菌落PCR 8、鉴定阳性就BMGY/BMMY培养诱导，甲醇浓度1%。 9、SDS-PAGE鉴定上清和沉淀 10、结果NOTHING!!!!! 问题：1怎么提高转化效率；2怎么改进鉴定是否表达   IMG_20160329_202711.jpg |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 质粒表达 |
» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有133人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
关于用酵母表达的设计引物问题
已经有0人回复- 生物技术各种实验protocol征集
已经有55人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
中国地质大学（武汉）杨明教授组招收2026年博士
+2/430
-
鲁东大学硕士研究生招生
+1/134
-
双一流大学湘潭大学“化工过程模拟与强化”国家地方联合工程研究中心招收各类博士生
+1/85
-
天津大学精密测试技术及仪器全国重点实验室柔性电子技术实验室专任副研究员招聘启事
+1/78
-
中国地质大学（武汉）—国家级青年人才杨明教授组-招收博士-新能源材料化学及催化材料
+1/77
-
澳门科技大学2026年数学博士招生—杨钧翔助理教授计算物理与数学课题组
+1/41
-
陕西师范大学应用表面与胶体化学教育部重点实验室刘静教授课题组招收硕/博士生
+2/38
-
QS TOP100英国南安普顿大学数字健康与生医工招博后，博士，Fellowship，访问学者
+1/35
-
南京理工大学优青课题组招收2026年博士1名（电催化方向）
+2/34
-
中南大学冶金与环境学院陈伟老师招收环境科学与工程2026年博士生1人
+1/31
-
西湖大学李小波课题组诚聘博士后3名（生物学方向）
+1/18
-
2026年博士申请-全固态锂金属电池方向-聚合物电解质+硫化物电解质
+1/12
-
限广州，征女友
+2/10
-
SCI辅 助
+1/10
-
3 纯 4 自 7 己 0 写 9 非 ③ 中 1 介 ⑦ 优0 惠，SCI辅助
+1/10
-
博士/硕士招生
+1/9
-
中山大学院士团队王来源教授课题组招聘博士后
+2/4
-
CSC 因斯布鲁克大学计算机系 联培/攻博
+1/3
-
招收2026年秋季入学博士生1名（北京科技大学 力学超材料/机器学习/增材制造相关方向）
+1/2
-
中国环境科学研究院-河湖流域地表、地下水环境碳氮磷循环-招聘联培、客座学生
+2/2
40楼2016-08-31 16:43:17
3楼2016-04-01 16:37:39
4楼2016-04-01 17:08:29
5楼2016-04-01 19:21:35
简单回复
冷雁孤旅2楼
2016-04-01 16:36
回复
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
qi 发自小木虫Android客户端
两脚泥day6楼
2016-04-01 19:44
回复
YX要努力7楼
2016-04-01 20:01
回复
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫Android客户端
阿尔法XMC12楼
2016-04-04 12:09
回复
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
