| 查看: 7452 | 回复: 49 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
毕赤酵母表达抗菌肽，做了几十次了，一直不表达
|
||||
|
本人是做毕赤酵母表达抗菌肽的新手，从开始什么都不知道，到现在碰到各种问题，试验操作上一些问题还可以看看论坛解决，但是这种表达不出来就不知道怎么解决了。 目的蛋白已经在大肠杆菌成功表达，在毕赤酵母做了几十次了，菌落PCR鉴定是阳性，诱导表达还是不表达，现在已经没有做实验的激情了！！！ 先说下自己试验步骤吧： 1、构建载体，测序鉴定正确 2、线性化载体，乙醇沉淀回收、凝胶回收、DNA纯化试剂盒回收都做过。 3、X33感受态制备 4、电击：电压2000V，电容25uF，电阻200，时间2 5、加山梨醇28度静置1h，涂抗生素终浓度100的YPDS平板 6、培养2、3天只能长个位数的转化子，效率太低了，自己也尝试过提高DNA浓度，但是还是效率低 7、挑单菌落划抗性平板，长出菌落后再做菌落PCR 8、鉴定阳性就BMGY/BMMY培养诱导，甲醇浓度1%。 9、SDS-PAGE鉴定上清和沉淀 10、结果NOTHING!!!!! 问题：1怎么提高转化效率；2怎么改进鉴定是否表达   IMG_20160329_202711.jpg |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 质粒表达 |
» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有107人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于用酵母表达的设计引物问题
已经有0人回复
- 生物技术各种实验protocol征集
已经有55人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
人生已过半程，不惑之年渐近，回望来时路，满心皆是感恩。
+5/1515
-
中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所博士后招聘
+1/284
-
山东建筑大学 （市政与环境工程学院）硕士研究生招生啦 静电纺丝纤维与盐水分离应用
+1/90
-
上海电力大学先进储能电池技术课题组招生
+1/85
-
福建农林大学材料工程学院高分子材料课题组招生
+1/79
-
重庆交通大学院士团队招收材料、能源动力专业硕士研究生
+2/52
-
武汉高校接受研究生调剂，材料、化学、纺织方向
+2/42
-
武汉工程大学资源生物技术课题组生物/环境/化工/矿物专业硕士、博士研究生招生及调剂
+1/17
-
中科院物理所二维材料方向招收推免研究生
+1/13
-
双一流湘潭大学化工学院招收化工、能源动力、工程热物理相关研究生调剂
+1/12
-
电子信息求调剂
+1/10
-
武汉纺织大学招收硕士研究生调剂
+1/7
-
中国科学院上海硅酸盐研究所招聘科研助理（纳米材料与生物应用方向）
+1/6
-
Top-88悉尼科技大学数据科学/AI 招收2027年入学 校奖 博士生1到2名(国际和本地学生）
+1/6
-
温州大学化材学院王娟课题组招生
+1/5
-
山东烟台某高校材料专业研究生调剂
+1/4
-
山东济南省属重点高校生态环境类硕士招生
+1/4
-
天津工业大学双一流高校招博士、硕士、博士后
+1/3
-
【博士招生】上海交通大学机动学院-招2026年秋“申请-考核制”博士生1名-3D打印方向
+1/3
-
双一流高校河南大学量子纳米光子学课题组光学、凝聚态博士招生
+1/2
21楼2016-04-05 11:21:40
3楼2016-04-01 16:37:39
4楼2016-04-01 17:08:29
5楼2016-04-01 19:21:35
简单回复
冷雁孤旅2楼
2016-04-01 16:36
回复
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
qi 发自小木虫Android客户端
两脚泥day6楼
2016-04-01 19:44
回复
YX要努力7楼
2016-04-01 20:01
回复
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫Android客户端
阿尔法XMC12楼
2016-04-04 12:09
回复
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
