24小时热门版块排行榜    

查看: 7476  |  回复: 49
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

I-Believe

新虫 (小有名气)


[交流] 毕赤酵母表达抗菌肽,做了几十次了,一直不表达

本人是做毕赤酵母表达抗菌肽的新手,从开始什么都不知道,到现在碰到各种问题,试验操作上一些问题还可以看看论坛解决,但是这种表达不出来就不知道怎么解决了。
目的蛋白已经在大肠杆菌成功表达,在毕赤酵母做了几十次了,菌落PCR鉴定是阳性,诱导表达还是不表达,现在已经没有做实验的激情了!!!
先说下自己试验步骤吧:
1、构建载体,测序鉴定正确
2、线性化载体,乙醇沉淀回收、凝胶回收、DNA纯化试剂盒回收都做过。
3、X33感受态制备
4、电击:电压2000V,电容25uF,电阻200,时间2
5、加山梨醇28度静置1h,涂抗生素终浓度100的YPDS平板
6、培养2、3天只能长个位数的转化子,效率太低了,自己也尝试过提高DNA浓度,但是还是效率低
7、挑单菌落划抗性平板,长出菌落后再做菌落PCR
8、鉴定阳性就BMGY/BMMY培养诱导,甲醇浓度1%。
9、SDS-PAGE鉴定上清和沉淀
10、结果NOTHING!!!!!
问题:1怎么提高转化效率;2怎么改进鉴定是否表达




毕赤酵母表达抗菌肽,做了几十次了,一直不表达
IMG_20160329_202711.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

质粒表达

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

I-Believe

新虫 (小有名气)


引用回帖:
19楼: Originally posted by luwei13566 at 2016-04-05 03:28:14
1.转化只长几个转化子绝对不正常,问题就在这里,筛查一下菌株和转化条件有没有问题吧!

请问筛选菌株什么意思?是转化子还是感受态菌株

发自小木虫Android客户端
21楼2016-04-05 11:21:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 50 个回答

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)


qi   dong   zi   shi   zhen  he  qidongzi

发自小木虫Android客户端
3楼2016-04-01 16:37:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

I-Believe

新虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2016-04-01 16:37:39
qi   dong   zi   shi   zhen  he  qidongzi

pPIC载体,启动子没问题。

发自小木虫Android客户端
4楼2016-04-01 17:08:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

粒粒分明

新虫 (初入文坛)



I-Believe(金币+1): 谢谢参与
我也是做酵母的,从胶上看,是不是蛋白浓度低?请问你的体系多大?

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-04-01 19:21:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
2016-04-01 16:36   回复  
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
qi 发自小木虫Android客户端
2016-04-01 19:44   回复  
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
发自小木虫IOS客户端
2016-04-01 20:01   回复  
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫Android客户端
2016-04-04 12:09   回复  
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 324求调剂 +3 hanamiko 2026-03-26 3/150 2026-03-26 21:00 by sanrepian
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 329求调剂 +11 想上学吖吖 2026-03-19 11/550 2026-03-26 20:30 by 不吃魚的貓
[考研] 281求调剂 +3 亚克西good 2026-03-26 5/250 2026-03-26 19:48 by 不吃魚的貓
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 296求调剂 +5 www_q 2026-03-20 5/250 2026-03-26 12:56 by 3Strings
[考研] 调剂310 +3 温柔的晚安 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:16 by peike
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分,求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 321求调剂 +3 璞玉~~ 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:07 by Zhanglab-TJU
[考研] 296求调剂 +4 汪!?! 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪!?!
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 070300化学求调剂 +9 苑豆豆 2026-03-20 9/450 2026-03-24 17:15 by licg0208
[考研] 300求调剂,材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪!?!
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
信息提示
请填处理意见