| 查看: 7449 | 回复: 49 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
毕赤酵母表达抗菌肽，做了几十次了，一直不表达
|
||||
|
本人是做毕赤酵母表达抗菌肽的新手，从开始什么都不知道，到现在碰到各种问题，试验操作上一些问题还可以看看论坛解决，但是这种表达不出来就不知道怎么解决了。 目的蛋白已经在大肠杆菌成功表达，在毕赤酵母做了几十次了，菌落PCR鉴定是阳性，诱导表达还是不表达，现在已经没有做实验的激情了！！！ 先说下自己试验步骤吧： 1、构建载体，测序鉴定正确 2、线性化载体，乙醇沉淀回收、凝胶回收、DNA纯化试剂盒回收都做过。 3、X33感受态制备 4、电击：电压2000V，电容25uF，电阻200，时间2 5、加山梨醇28度静置1h，涂抗生素终浓度100的YPDS平板 6、培养2、3天只能长个位数的转化子，效率太低了，自己也尝试过提高DNA浓度，但是还是效率低 7、挑单菌落划抗性平板，长出菌落后再做菌落PCR 8、鉴定阳性就BMGY/BMMY培养诱导，甲醇浓度1%。 9、SDS-PAGE鉴定上清和沉淀 10、结果NOTHING!!!!! 问题：1怎么提高转化效率；2怎么改进鉴定是否表达   IMG_20160329_202711.jpg |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 质粒表达 |
» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有116人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于用酵母表达的设计引物问题
已经有0人回复
- 生物技术各种实验protocol征集
已经有55人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
祈福中标
+1/225
-
数一英一硕士调剂（双一流高校）
+1/190
-
香港中文大学（深圳）靳羽华教授交叉实验室招募2026年材料学博士生（光致变色）
+2/122
-
欢迎环境科学与工程、水利工程专业研究生加入北师大珠海校区董越课题组
+1/88
-
西南交通大学医学院招收生物医学工程和材料与化工专业硕士研究生
+1/85
-
Postdoc position in Hangzhou Normal University （陈健翔组博后招聘）
+1/83
-
福建农林大学材料工程学院高分子材料课题组招生
+1/79
-
浙江大学侯阳教授团队诚聘博士后---高性能固态电解质与固态电池器件设计
+1/76
-
资源与环境专硕
+1/73
-
散金币，求基金中标！！
+1/58
-
重庆交通大学院士团队招收材料、能源动力专业硕士研究生
+2/52
-
中国科学院上海硅酸盐研究所施剑林院士团队胡萍课题组招聘博士后
+1/15
-
南京林业大学-国家级青年人才团队 招2026级博士、硕士（合成化学、植物化学方向）
+1/12
-
中国地质大学（武汉）清洁能源与资源循环团队诚招科研助理/2026级硕士、博士生/博士后
+1/5
-
温州大学化材学院王娟课题组招生
+1/5
-
博士招生 | 青岛科技大学（高分子、化学、材料、力学、航天、机电工程、计算机仿真）
+1/4
-
[求调剂]郑州大学生物技术专业 一志愿浙大生科院340分
+1/1
-
上海交通大学AIMS-Lab招收AI for Science【智能制造】方向2026级博士生
+1/1
-
福建师范大学环境与资源学院招收2026级硕士生
+1/1
-
南昌航空大学拟招收飞行器设计或计算流体力学研究方向博士生 1名
+1/1
13楼2016-04-04 12:19:29
3楼2016-04-01 16:37:39
4楼2016-04-01 17:08:29
5楼2016-04-01 19:21:35
简单回复
冷雁孤旅2楼
2016-04-01 16:36
回复
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
qi 发自小木虫Android客户端
两脚泥day6楼
2016-04-01 19:44
回复
YX要努力7楼
2016-04-01 20:01
回复
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
祝福 发自小木虫Android客户端
阿尔法XMC12楼
2016-04-04 12:09
回复
I-Believe(金币+1): 谢谢参与
