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western blot出现奇怪现象！！
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 本人做western有大半年了，以前都好好的，最近出现奇怪现象：上周连续做了4次，样品均是同一批测浓度、制样，可是第1、3次gadph和目的条带（55KDa、130KDa）都好好的，第2、4次目的条带不错，但内参很不齐，有的泳道条带浓缩成一点，有的泳道甚至没有条带。这4次中，前两次孵育的是相同一抗，后两次也是新配的相同一抗，4次试验的二抗都相同。 本周我又做了两次，还是第一次正常，第二次gadph和55KDa的目的条带出现不齐、甚至空白的泳道。请问大神们这是什么原因啊？？ PS： 跑10% SDS-PAGE 60V 半小时，110V 2小时；PVDF膜转膜250mA 2.5h；5%脱脂牛奶封闭，一抗用5% BSA稀释（1：1000），二抗用TBST稀释（1：10000）.  gadph 3m56s.jpg  gadph 5m38s.jpg  目的条带 8s.jpg |
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