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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 有关双酶切问题
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HUALAWU

新虫 (小有名气)

[求助] 有关双酶切问题 已有1人参与

请问，双酶切质粒载体，由于没有合适的共同buffer，所以分开切的，但是第一个酶切完，没有进行回收纯化，而是在原有基础上继续加第二个酶和buffer进行酶切，这样的影响大吗？第一个酶的buffer会不会影响第二个酶的作用，有什么补救方法么？
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努力成就更好的自己
1楼 2016-03-31 20:20:18
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HUALAWU

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by a86052 at 2016-04-01 01:59:28
猜测下，可能会有影响吧，最好还是第一个切好了回收下再切，个人意见。因为如果可以楼主这样切，那么应该可以有合适的buffer直接双酶切了吧，不过这也说不定。

谢谢哈，加完第二酶切了大概40分钟，我还是不放心，还是用PCR纯化试剂盒纯化了下重新切的，结果还不错。
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努力成就更好的自己
3楼2016-04-04 20:27:12
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
猜测下，可能会有影响吧，最好还是第一个切好了回收下再切，个人意见。因为如果可以楼主这样切，那么应该可以有合适的buffer直接双酶切了吧，不过这也说不定。
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HUALAWU
2楼2016-04-01 08:59:28
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