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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药剂学 » 关于PLGA微球制备的问题
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丁勤奋

金虫 (小有名气)

[求助] 关于PLGA微球制备的问题 已有3人参与

本人第一次做微球，有好多问题想求助于各位大神，各位见笑了。
用复乳溶剂挥发法制备载蛋白的PLGA微球，外水相用PVA, 用紫外法测定蛋白的含量。做蛋白标曲的时候，是不是要用相应浓度的PVA溶液做空白啊，
我是这样做标曲的，大家看这样对吗？
              0     1       2        3      4       5       6       7       8      9   
蛋白       0     0.1   0.2    0.3    0.4   0.5    0.6     0.7   0.8    0.9   ml
5%PVA  0.1   0.1  0.1     0.1   0.1    0.1    0.1     0.1   0.1    0.1  ML
水         0.9    0.8   0.7   0.6    0.5    0.4    0.3     0.2   0.1    0     ml

按照文献的步骤做到挥发完二氯甲烷后，离心，然后取上清液，测游离蛋白的吸光度，根据标曲计算游离药物的含量，
包封率=（总的投药量-游离药物量）/总投药量*100%

这时，用紫外测游离蛋白的吸光度时，是不是也应以相应浓度的PVA溶液做空白对照呢？紫外特别不稳呀，有时计算包封率都成了负值……
现在脑子感觉转不过弯了，希望各位给以指正指导。谢谢啦
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1楼 2016-03-29 21:25:55
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wpk9904

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
丁勤奋: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-03-30 14:51:21
首先，你制作标曲时，你要确定你标曲的精密度，明白吗？后面的结果很容易出现负值的原因是：前面的标曲适用方位太大了，例如适合蛋白的浓度为1-100 mg/ml，但你后面测游离时由于被稀释了很多倍，导致游离药物的浓度可能只有0.1，此时你把它带入标曲就很容易出现问题，这是不可以的。
对于要不要加PVA溶液做空白，我的建议是前后保持一致吧，如果加整个实验都加，如果不加，整个实验就都别加。如果没有明显的吸光度，和水一样，就不用加了
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丁勤奋
2楼2016-03-30 08:12:24
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丁勤奋

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wpk9904 at 2016-03-30 08:12:24
首先，你制作标曲时，你要确定你标曲的精密度，明白吗？后面的结果很容易出现负值的原因是：前面的标曲适用方位太大了，例如适合蛋白的浓度为1-100 mg/ml，但你后面测游离时由于被稀释了很多倍，导致游离药物的浓度 ...

你好，谢谢回复，我还是有些疑问。
我做标曲时，蛋白的浓度从小到大是
0.0077、0.0154、0.0231、0.0308、0.0385、0.0462、0.0539、0.0616、0.0693
标准曲线回归方程是y=7.0519x+0.04472
然后制备微球，考察单因素，比如，用3%PVA做外水相时，就取1ml 3%PVA做空白对照，加考马斯亮蓝5ml，然后取上清液，测定吸光度。有时测出的吸光度为0.034，根本就没法带入方程呀。而且吸光度在0.2-0.8才稳定。而我测得的吸光度都是0.0几的。超过0.2的计算出来的游离药量就超过总的投药量了。

不好意思，表述的可能不清楚，希望能帮我指正哪些步骤做错了。谢谢了
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3楼2016-03-31 16:13:00
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wpk9904

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
丁勤奋: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-04-01 16:00:37
引用回帖:
3楼: Originally posted by 丁勤奋 at 2016-03-31 16:13:00
你好，谢谢回复，我还是有些疑问。
我做标曲时，蛋白的浓度从小到大是
0.0077、0.0154、0.0231、0.0308、0.0385、0.0462、0.0539、0.0616、0.0693
标准曲线回归方程是y=7.0519x+0.04472
然后制备微球，考察单因 ...

你所述说的情况我以前遇到过。的确吸光度过低时没有办法的，超出了紫外分光光度计的使用范围。所以针对该仪器我没有很好的建议。但还是有一些替代办法的。
我不知道你们实验室有没有核酸蛋白检测仪，就是与凝胶色谱柱相连的一种仪器。它的原理和紫外分光光度计的原理是一样的，而且测定你这个绝对没问题，有的话恭喜你。
没有的话你只能换其他包封率的测定方法了。高效液相也可以，就是太麻烦。
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4楼2016-03-31 23:16:11
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欧阳626

新虫 (初入文坛)
您好，我也是做PLGA微球的，也是载蛋白，我想请问一下，合成过程中的二氯甲烷会伤害蛋白，或者说二氯甲烷会让蛋白变性吗？我有这个顾虑，万幸看到了您的求助贴，特来询问
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5楼2022-04-18 09:43:14
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欧阳626

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主，您好，我也是做用PLGA合成微球，也是包裹蛋白，我有一个疑惑，就是合成过程中的二氯甲烷会不会伤害蛋白或者说会让蛋白变性，万幸在小木虫上看到您的发帖，所以想问问您。
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6楼2022-04-18 09:53:44
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脂质体

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 欧阳626 at 2022-04-18 09:53:44
楼主，您好，我也是做用PLGA合成微球，也是包裹蛋白，我有一个疑惑，就是合成过程中的二氯甲烷会不会伤害蛋白或者说会让蛋白变性，万幸在小木虫上看到您的发帖，所以想问问您。

可能两相界面及乳化均质的剪切力对蛋白的影响，比起DCM本身对蛋白的影响更大吧。选择适合处方工艺，可能能够降低蛋白的变性失活，但更关键是保证批间差异小，且释放特性符合要求
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7楼2022-05-12 10:59:37
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