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关于PLGA微球制备的问题 已有3人参与
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本人第一次做微球，有好多问题想求助于各位大神，各位见笑了。 用复乳溶剂挥发法制备载蛋白的PLGA微球，外水相用PVA, 用紫外法测定蛋白的含量。做蛋白标曲的时候，是不是要用相应浓度的PVA溶液做空白啊， 我是这样做标曲的，大家看这样对吗？ 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 蛋白 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 ml 5%PVA 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 ML 水 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 ml 按照文献的步骤做到挥发完二氯甲烷后，离心，然后取上清液，测游离蛋白的吸光度，根据标曲计算游离药物的含量， 包封率=（总的投药量-游离药物量）/总投药量*100% 这时，用紫外测游离蛋白的吸光度时，是不是也应以相应浓度的PVA溶液做空白对照呢？紫外特别不稳呀，有时计算包封率都成了负值…… 现在脑子感觉转不过弯了，希望各位给以指正指导。谢谢啦 |
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【答案】应助回帖
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首先，你制作标曲时，你要确定你标曲的精密度，明白吗？后面的结果很容易出现负值的原因是：前面的标曲适用方位太大了，例如适合蛋白的浓度为1-100 mg/ml，但你后面测游离时由于被稀释了很多倍，导致游离药物的浓度可能只有0.1，此时你把它带入标曲就很容易出现问题，这是不可以的。 对于要不要加PVA溶液做空白，我的建议是前后保持一致吧，如果加整个实验都加，如果不加，整个实验就都别加。如果没有明显的吸光度，和水一样，就不用加了 |
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2楼2016-03-30 08:12:24
送红花一朵 |
你好，谢谢回复，我还是有些疑问。 我做标曲时，蛋白的浓度从小到大是 0.0077、0.0154、0.0231、0.0308、0.0385、0.0462、0.0539、0.0616、0.0693 标准曲线回归方程是y=7.0519x+0.04472 然后制备微球，考察单因素，比如，用3%PVA做外水相时，就取1ml 3%PVA做空白对照，加考马斯亮蓝5ml，然后取上清液，测定吸光度。有时测出的吸光度为0.034，根本就没法带入方程呀。而且吸光度在0.2-0.8才稳定。而我测得的吸光度都是0.0几的。超过0.2的计算出来的游离药量就超过总的投药量了。  不好意思，表述的可能不清楚，希望能帮我指正哪些步骤做错了。谢谢了 |
3楼2016-03-31 16:13:00
wpk9904
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