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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)

[交流] XbaI单酶切pUC18质粒的问题

    将购买的pUC18质粒转化到大肠杆菌后抽提质粒,用XbaI做单酶切试验,但总是酶切不完全(得到两条挨得很近的条带)。而选用购买得到的纯pUC质粒酶切,却可以完全酶切。
    尝试降低模板量,结果依然一样;而采用BamHI却可以完全酶切,没有任何问题。
    是因为甲基化的影响吗?还是质粒本身纯度的关系?
    因为打算分步酶切,所以希望第一步酶切尽可能完全,这样可以通过乙醇沉淀进行回收,而不是需要两次切胶回收,那样回收率太低了,需要的质粒量很大,也比较费时。
    请教各位,该怎么解决这个问题呢???
    谢谢啊!!!
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赠人玫瑰,手有余香。
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)

嗯好的,谢谢楼上。
赠人玫瑰,手有余香。
4楼2008-10-22 10:06:21
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查看全部 5 个回答

zhongdianshi

银虫 (小有名气)

我认为是你自己提取的质粒纯度不好。如果,用量比较大的话,可以尝试大量提取,然后,再酶切试试。
引用回帖:
Originally posted by 胡笳桃子 at 2008-10-21 09:36:
    将购买的pUC18质粒转化到大肠杆菌后抽提质粒,用XbaI做单酶切试验,但总是酶切不完全(得到两条挨得很近的条带)。而选用购买得到的纯pUC质粒酶切,却可以完全酶切。
    尝试降低模板量,结果依然一 ...

2楼2008-10-22 07:20:35
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boouy

银虫 (正式写手)

应该是甲基化的问题,可以选择别的菌株。
3楼2008-10-22 09:46:37
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

把购买的载体转化了 再用 不知道可行不可行
我认为肯定有问题 否则公司还怎么买载体挣钱呢
5楼2008-10-22 11:46:44
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