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XbaI单酶切pUC18质粒的问题
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将购买的pUC18质粒转化到大肠杆菌后抽提质粒，用XbaI做单酶切试验，但总是酶切不完全（得到两条挨得很近的条带）。而选用购买得到的纯pUC质粒酶切，却可以完全酶切。 尝试降低模板量，结果依然一样；而采用BamHI却可以完全酶切，没有任何问题。 是因为甲基化的影响吗？还是质粒本身纯度的关系？ 因为打算分步酶切，所以希望第一步酶切尽可能完全，这样可以通过乙醇沉淀进行回收，而不是需要两次切胶回收，那样回收率太低了，需要的质粒量很大，也比较费时。 请教各位，该怎么解决这个问题呢？？？ 谢谢啊！！！ |
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snzydong
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5楼2008-10-22 11:46:44