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lubov120451

新虫 (初入文坛)

[求助] Hela细胞瞬时转染总是失败 已有5人参与

我做的是hela细胞的瞬时转染,然后设了一个pccl-GFP组来观察转染效率,在转染24h于荧光显微镜下观察荧光,每次都只是几颗绿色荧光,按道理是成片的绿色荧光。使用的是脂质体转染,lip2000按照质粒:lip2000=1:2的比例加入,还希望大神指点,已经重复2次了,都是失败,找不到原因
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

转染后时间不能间隔太长,不然荧光容易猝灭。我们实验室做RFect转染的A549细胞后的6小时观察了荧光,看到的荧光还挺多。另外,看荧光也只能作为参考,最好做个48h后qPCR检测。
7楼2019-08-26 09:39:00
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以考虑下电转,实在不行,看看你实验室有没有其他可以用的表达载体或细胞吧。
2楼2016-03-28 10:34:47
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小土圆子

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道你转的是什么质粒呢 我们实验室用的是293细胞
3楼2016-03-29 21:22:29
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ysk1989

新虫 (小有名气)


lipo2000的细胞毒性大,转染效率很低。我们实验室现在用的是英格恩生物的转染试剂。英格恩生物转染试剂的出现无疑是转染试剂领域的重大突破,纳米聚合物材料,细胞毒性低,转染效率高,远远超越脂质体。而且还很便宜,比lipo2000强多了。可以试一下。
5楼2016-07-29 10:18:23
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