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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » Hela细胞瞬时转染总是失败
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lubov120451

新虫 (初入文坛)

[求助] Hela细胞瞬时转染总是失败 已有5人参与

我做的是hela细胞的瞬时转染，然后设了一个pccl-GFP组来观察转染效率，在转染24h于荧光显微镜下观察荧光，每次都只是几颗绿色荧光，按道理是成片的绿色荧光。使用的是脂质体转染，lip2000按照质粒：lip2000=1：2的比例加入，还希望大神指点，已经重复2次了，都是失败，找不到原因
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1楼 2016-03-28 10:13:05
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以考虑下电转，实在不行，看看你实验室有没有其他可以用的表达载体或细胞吧。
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2楼2016-03-28 10:34:47
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小土圆子

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你转的是什么质粒呢 我们实验室用的是293细胞
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3楼2016-03-29 21:22:29
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dealer

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

内容已删除
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4楼2016-05-23 16:11:04
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ysk1989

新虫 (小有名气)
lipo2000的细胞毒性大，转染效率很低。我们实验室现在用的是英格恩生物的转染试剂。英格恩生物转染试剂的出现无疑是转染试剂领域的重大突破，纳米聚合物材料，细胞毒性低，转染效率高，远远超越脂质体。而且还很便宜，比lipo2000强多了。可以试一下。
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5楼2016-07-29 10:18:23
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西湖鸟

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼上应该没转进去，而且lipo2000毒性太大，不建议使用。Hela属于比较好转的细胞，我用RFect小核酸转染试剂做siRNA瞬时转染，可以做到90%以上的敲出效率，细胞死的比较少，还可以。
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6楼2018-10-17 14:38:01
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宇宙小妖怪

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

转染后时间不能间隔太长，不然荧光容易猝灭。我们实验室做RFect转染的A549细胞后的6小时观察了荧光，看到的荧光还挺多。另外，看荧光也只能作为参考，最好做个48h后qPCR检测。
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7楼2019-08-26 09:39:00
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