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上海波粒

铜虫 (正式写手)


[交流] 液相色谱柱选择 已有8人参与

液相色谱柱决定最终分离效果,所以在选择色谱柱时候有必要考虑清楚自己的需求。
首先液相色谱柱目前来说分为正反相色谱柱,正相有SI等,反相有C18等。正相主要分离极性物质,反相主要分离非极性物质,氨基柱等主要分离二者之间的。
明确了色谱柱大概功能之后,确认下自己样品信息,基本就有点眉目了,方向对了,剩下的事情就是细节了如:键合相、粒径、孔径、碳载量等
键合相:确定了正反相后基本就简单了,正相很简单,我们重点讨论下反相,C18主要分离非极性和弱极性物质,因为是键合硅胶,所以C18也分好几种有常规的如C18-A,耐纯水的OL Apple C18-AQ、耐酸碱的OL Apple C18-EX等,如果发现C18保留很弱,调整流动相也不行,这个时候可以考虑C8甚至C4等。
粒径:色谱法追求的是高效、高分辨、高速等。目前来说亚2um填料或者2UM核壳填料是很理想的模型,基本具备“三高”特征尤其是高速,线速度不在影响分离度,不过附带的缺点就是高压,要升级相应的硬件,成本高昂,需要谨慎考虑。
5um填料最普遍,目前来说完全可以胜任各种日常检测,即使有特殊要求,3um色谱填料基本上也能全覆盖,不过该模型下线速度和分离度是成反比的。
孔径:目前很多60~300A都有,甚至更高或者更低的。开孔的填料多了个类似分子筛功能,所以选择孔径一定要关注分子量,蛋白(分子量5000以上)一般都需要在160A以上,多肽(分子量上限在3000左右)在120A左右,一般快速柱孔径都很小,可以缩短样品路径。所以国际上还有无孔硅胶柱子,也很适合蛋白分离,彻底解决蛋白分子量大和太粘稠堵住孔径问题。
碳载量:快速柱碳载量很低,如A家等,省时间,省溶剂,但分析部分复杂样品如中药等有点力不从心,这个时候可以考虑英国OL Apple色谱柱,碳载量15~23%,碳载量数值就像河床的水草,越高代表越密集,保留样品能力越强,越有可能分离开难分离物质。
以上信息仅供参考,个人能力有限,欢迎大伙补充!
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3楼: Originally posted by 爱雪飘飘 at 2016-03-28 15:23:07
如果发现C18保留很弱,调整流动相也不行,这个时候可以考虑C8甚至C4等

你在瞎扯吧

C8报弱极性能力比C18强,你不会不知道吧?
4楼2016-03-28 18:22:13
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7楼2016-04-05 15:24:32
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8楼: Originally posted by lingshu at 2016-04-05 15:40:44
什么意思  楼主能否详细说一下   我只知道一般情况下C8与C18wl具有类似保留性质  但是保留比C18要弱啊
...

反相主要是分离非极性物质,弱极性物质等,C8极性要强于C18,C18对弱极性物质保留能力不强,这个时候就可以考虑用C8,请注意,此时讨论的是弱极性,不是非极性,非极性物质C18保留能力比C8强
9楼2016-04-05 16:51:28
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14楼: Originally posted by wanglujun111 at 2016-04-11 19:38:59
你这是在误导人吗?弱极性的物质在C18上保留比C8要弱?...

你自己去尝试去,你看看C18柱子分离弱极性物质保留弱的时候,C8是否能有效改善
15楼2016-04-12 08:39:47
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16楼: Originally posted by wanglujun111 at 2016-04-12 09:07:00
C18对极性低的肯定保留要强些哈...

你觉得甲醇洗脱能力强,还是乙腈洗脱能力强
17楼2016-04-12 09:09:49
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13楼: Originally posted by liukuo1 at 2016-04-11 15:54:13
基本上在瞎扯些皮毛。我这样说会不会很得罪人?

如果聊深的话,估计国内也没几个人说的清楚的,我们需要进步的空间还很大
18楼2016-04-12 09:10:35
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19楼2016-04-12 09:11:20
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16楼: Originally posted by wanglujun111 at 2016-04-12 09:07:00
C18对极性低的肯定保留要强些哈...

另外我们是在同等弱极性物质下,比较C18和C8保留能力问题,不要混肴了
20楼2016-04-12 09:12:54
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