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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建
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wuxchao

木虫 (小有名气)

[交流] 载体构建 已有6人参与

做RNA干扰，构建干扰载体时，目的片段200bp与线性载体连接后转化大肠杆菌无菌落产生，求交流

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shx0743

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1楼 2016-03-25 06:45:50
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轩逸lei

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主，做成功了吗，我也在做RNAi干扰，一个方向连上了，就是另外一个方向一直连不上

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12楼2017-06-25 23:16:11
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玉兔Jane

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-04-04 09:44:19
1、连接不成功，假设双酶切，原因：目的片段没切开；质粒没有切开；T4连接问题
2、转化不成功
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2楼2016-03-26 17:34:57
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wuxchao

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 玉兔Jane at 2016-03-26 17:34:57
1、连接不成功，假设双酶切，原因：目的片段没切开；质粒没有切开；T4连接问题
2、转化不成功

载体切开了，目的片段确定是切开了，T4考虑到了，在准备换着试试

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3楼2016-03-27 09:47:37
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玉兔Jane

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by wuxchao at 2016-03-27 09:47:37
载体切开了，目的片段确定是切开了，T4考虑到了，在准备换着试试
...

看下T4连接酶的说明书，PCR产物和载体的比例在一个范围内效果比较好。
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4楼2016-03-27 11:18:36
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