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wuxchao

木虫 (小有名气)

[交流] 载体构建 已有6人参与

做RNA干扰,构建干扰载体时,目的片段200bp与线性载体连接后转化大肠杆菌无菌落产生,求交流

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wuxchao

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 玉兔Jane at 2016-03-26 17:34:57
1、连接不成功,假设双酶切,原因:目的片段没切开;质粒没有切开;T4连接问题
2、转化不成功

载体切开了,目的片段确定是切开了,T4考虑到了,在准备换着试试

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3楼2016-03-27 09:47:37
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玉兔Jane

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-04-04 09:44:19
1、连接不成功,假设双酶切,原因:目的片段没切开;质粒没有切开;T4连接问题
2、转化不成功
2楼2016-03-26 17:34:57
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玉兔Jane

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by wuxchao at 2016-03-27 09:47:37
载体切开了,目的片段确定是切开了,T4考虑到了,在准备换着试试
...

看下T4连接酶的说明书,PCR产物和载体的比例在一个范围内效果比较好。
4楼2016-03-27 11:18:36
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shx0743

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
最近我也要坐这个,楼主,等你好消息,记得分享下!

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5楼2016-03-28 21:25:36
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