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想学好的学渣

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 用乙醇沉淀后进行双酶切,切不出来条带 已有3人参与

各位战友,我有个问题想请教一下,用乙醇沉淀后进行双酶切,切不出来条带,请问是为什么呢,用的宝生物的快切酶。相同条件下的不沉淀则可以切成功(乙醇沉淀:加两倍体积的无水乙醇,1/10体积的NaAc,混匀,-20度放15分钟,14000rpm,10分钟离心,弃上清,再加1ml 75%的乙醇,8500rpm,10分钟,控干),能为我指点一下迷津吗?谢谢!
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想学好的学渣

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-25 16:48:28
乙醇会影响酶的活性...

谢谢!

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7楼2016-03-26 09:58:17
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卡维斯

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
应该是乙醇残留问题吧
2楼2016-03-24 18:02:31
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原海亮

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
酶切后条带什么样子?有载体条带么?

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
3楼2016-03-24 18:47:52
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想学好的学渣

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-24 18:47:52
酶切后条带什么样子?有载体条带么?

有条带,但是大小不晓得对不对,因为两个酶切位点也就相隔几十bp,图现在没有了额。没有做单酶切对照

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4楼2016-03-25 14:30:45
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