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自然茶

新虫 (小有名气)

[求助] 原核表达 已有6人参与

最近做重组质粒转化试验,pet32a质粒,转化bl21感受态,一直不长菌。找不到原因,求助大家

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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不长菌原因太多了吧,你感受态效率怎么样,涂板抗性是否有错,载体和片段酶切处理怎么样,连接效率怎么样……

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-03-21 12:12:56
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star013

新虫 (知名作家)


我们公司可以帮您做表达纯化

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3楼2016-03-21 12:25:30
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自然茶

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-21 12:12:56
不长菌原因太多了吧,你感受态效率怎么样,涂板抗性是否有错,载体和片段酶切处理怎么样,连接效率怎么样……

我能想到,也就是后者了酶切和载体

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4楼2016-03-21 12:57:39
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momo1943

银虫 (初入文坛)

对照组???
5楼2016-03-21 14:00:11
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自然茶

新虫 (小有名气)

感受态刚新到的,不该有问题。对照质粒也没长。操作按步骤进行的。热激45s.这个一秒都不能差吗

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6楼2016-03-21 15:16:26
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自然茶

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by momo1943 at 2016-03-21 14:00:11
对照组???

打错地方了,下面是回复

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7楼2016-03-21 15:17:05
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-字仲康

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

8楼2016-03-24 08:42:09
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刘氏响声丸

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
挨个筛查吧,先用厂家的治质粒转一下看看长不长,然后再转你自己的质粒
可以调整转入的量,多一点试试
热激活时间不必要这么严格吧,我用bl21是1分钟42度

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
9楼2016-03-24 08:42:49
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zhenxiangkai

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

转化不会这么难吧 做个对照看看
10楼2016-03-24 11:15:23
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