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自然茶

新虫 (小有名气)

[求助] 原核表达 已有6人参与

最近做重组质粒转化试验，pet32a质粒，转化bl21感受态，一直不长菌。找不到原因，求助大家

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1楼 2016-03-21 09:25:31
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不长菌原因太多了吧，你感受态效率怎么样，涂板抗性是否有错，载体和片段酶切处理怎么样，连接效率怎么样……

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2016-03-21 12:12:56
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star013

新虫 (知名作家)
我们公司可以帮您做表达纯化

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3楼2016-03-21 12:25:30
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自然茶

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-21 12:12:56
不长菌原因太多了吧，你感受态效率怎么样，涂板抗性是否有错，载体和片段酶切处理怎么样，连接效率怎么样……

我能想到，也就是后者了酶切和载体

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4楼2016-03-21 12:57:39
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momo1943

银虫 (初入文坛)
对照组???
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5楼2016-03-21 14:00:11
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自然茶

新虫 (小有名气)
感受态刚新到的，不该有问题。对照质粒也没长。操作按步骤进行的。热激45s.这个一秒都不能差吗

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6楼2016-03-21 15:16:26
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自然茶

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by momo1943 at 2016-03-21 14:00:11
对照组???

打错地方了，下面是回复

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7楼2016-03-21 15:17:05
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
8楼2016-03-24 08:42:09
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刘氏响声丸

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
挨个筛查吧，先用厂家的治质粒转一下看看长不长，然后再转你自己的质粒
可以调整转入的量，多一点试试
热激活时间不必要这么严格吧，我用bl21是1分钟42度

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2016-03-24 08:42:49
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zhenxiangkai

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

转化不会这么难吧 做个对照看看
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10楼2016-03-24 11:15:23
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