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匿名

用户注销 (正式写手)

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11楼2016-03-21 07:24:26
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1 PAHs degrader在实验过程中的的确确经常有杂菌
2 正确的做法是在PAHs 平板上长出来后,持续在R2A或者LB平板上分离纯化3-5次,获得的单菌落测试其降解能力,如果依然具有降解能力,就进行保种
3 测序的时候,自己做PCR, TA克隆,然后送去持续。很多人不喜欢用TA克隆测序,而习惯用PCR,我个人认为,这样不好!

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致良知
12楼2016-03-22 09:17:58
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ddyant

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1. 从峰图看模板应该是纯的,否则同一位置应该有不同高度的套峰,所以我怀疑技术人员的解释有些问题,至少你这次这个峰图看不出有DNA交叉污染迹象。
2. 技术人员解释说细菌壁太厚没打开,我认为这个解释有一定道理。从峰图看锐利度明显不够,造成这个原因的因素有很多,试剂,反应温度,模板量都有可能。测序公司走样都是模式化的也就是第一个启动cycle的时间可能就是3-5分钟左右,后面的解链时间更短。如果第一次细胞没打开后面可能要到多个循环后细胞才被裂开,最后峰图可能就跑不出来。
3.个人建议你先采用上面网友提到的菌落PCR建议,第一个循环95度用10-15分钟裂细胞从而增加模板浓度。如果能扩出来基本就可以确定是模板量不够导致的。当然菌落PCR也有干扰问题,如果直接PCR还没有结果建议先用95度裂细胞10-15分钟,然后离心取上清DNA做PCR模板减少其它细胞组分干扰。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

好好学习,天天向上,做个合格的搬砖人
13楼2016-03-23 04:30:53
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tkl0621

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by ddyant at 2016-03-23 04:30:53
1. 从峰图看模板应该是纯的,否则同一位置应该有不同高度的套峰,所以我怀疑技术人员的解释有些问题,至少你这次这个峰图看不出有DNA交叉污染迹象。
2. 技术人员解释说细菌壁太厚没打开,我认为这个解释有一定道理 ...

非常感谢,好专业的回答

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14楼2016-03-23 21:25:37
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tkl0621

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by quiller2000 at 2016-03-22 09:17:58
1 PAHs degrader在实验过程中的的确确经常有杂菌
2 正确的做法是在PAHs 平板上长出来后,持续在R2A或者LB平板上分离纯化3-5次,获得的单菌落测试其降解能力,如果依然具有降解能力,就进行保种
3 测序的时候,自己 ...

谢谢,值得学习

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15楼2016-03-23 21:26:24
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小落落1929

新虫 (正式写手)

请问多环芳烃分子的尺寸是多少  指大致的长宽高

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16楼2016-05-13 19:21:44
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tkl0621

金虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 小落落1929 at 2016-05-13 19:21:44
请问多环芳烃分子的尺寸是多少  指大致的长宽高

溶解到丙酮是看不到的,如果是固体颗粒的话,大概是在1~1.5mm左右

发自小木虫Android客户端
17楼2016-05-14 13:47:14
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小落落1929

新虫 (正式写手)

引用回帖:
17楼: Originally posted by tkl0621 at 2016-05-14 13:47:14
溶解到丙酮是看不到的,如果是固体颗粒的话,大概是在1~1.5mm左右
...

不是颗粒 是一个分子的大小   你知道吗?求赐教

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18楼2016-05-14 21:04:32
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tkl0621

金虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 小落落1929 at 2016-05-14 21:04:32
不是颗粒 是一个分子的大小   你知道吗?求赐教
...

对不起,这么晚才回复你,我也不太清楚的
19楼2016-05-30 11:27:13
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海阔天空-123

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

您好!我们可以帮助您对接检测
20楼2016-06-08 11:25:22
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