应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 分类/鉴定 » 培养的多环芳烃细菌，最近送样去北京检测，pcr扩增无果
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
232/3返回列表上一页123下一页
查看: 1909  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
11楼2016-03-21 07:24:26
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1 PAHs degrader在实验过程中的的确确经常有杂菌
2 正确的做法是在PAHs 平板上长出来后，持续在R2A或者LB平板上分离纯化3-5次，获得的单菌落测试其降解能力，如果依然具有降解能力，就进行保种
3 测序的时候，自己做PCR， TA克隆，然后送去持续。很多人不喜欢用TA克隆测序，而习惯用PCR，我个人认为，这样不好！
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

tkl0621 tkl0621
致良知
12楼2016-03-22 09:17:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ddyant

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1. 从峰图看模板应该是纯的，否则同一位置应该有不同高度的套峰，所以我怀疑技术人员的解释有些问题，至少你这次这个峰图看不出有DNA交叉污染迹象。
2. 技术人员解释说细菌壁太厚没打开，我认为这个解释有一定道理。从峰图看锐利度明显不够，造成这个原因的因素有很多，试剂，反应温度，模板量都有可能。测序公司走样都是模式化的也就是第一个启动cycle的时间可能就是3-5分钟左右，后面的解链时间更短。如果第一次细胞没打开后面可能要到多个循环后细胞才被裂开，最后峰图可能就跑不出来。
3.个人建议你先采用上面网友提到的菌落PCR建议，第一个循环95度用10-15分钟裂细胞从而增加模板浓度。如果能扩出来基本就可以确定是模板量不够导致的。当然菌落PCR也有干扰问题，如果直接PCR还没有结果建议先用95度裂细胞10-15分钟，然后离心取上清DNA做PCR模板减少其它细胞组分干扰。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

tkl0621
好好学习，天天向上，做个合格的搬砖人
13楼2016-03-23 04:30:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tkl0621

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by ddyant at 2016-03-23 04:30:53
1. 从峰图看模板应该是纯的，否则同一位置应该有不同高度的套峰，所以我怀疑技术人员的解释有些问题，至少你这次这个峰图看不出有DNA交叉污染迹象。
2. 技术人员解释说细菌壁太厚没打开，我认为这个解释有一定道理 ...

非常感谢，好专业的回答

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
14楼2016-03-23 21:25:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tkl0621

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by quiller2000 at 2016-03-22 09:17:58
1 PAHs degrader在实验过程中的的确确经常有杂菌
2 正确的做法是在PAHs 平板上长出来后，持续在R2A或者LB平板上分离纯化3-5次，获得的单菌落测试其降解能力，如果依然具有降解能力，就进行保种
3 测序的时候，自己 ...

谢谢，值得学习

发自小木虫Android客户端
回复此楼
15楼2016-03-23 21:26:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小落落1929

新虫 (正式写手)
请问多环芳烃分子的尺寸是多少  指大致的长宽高

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
16楼2016-05-13 19:21:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tkl0621

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 小落落1929 at 2016-05-13 19:21:44
请问多环芳烃分子的尺寸是多少  指大致的长宽高

溶解到丙酮是看不到的，如果是固体颗粒的话，大概是在1～1.5mm左右

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
17楼2016-05-14 13:47:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小落落1929

新虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by tkl0621 at 2016-05-14 13:47:14
溶解到丙酮是看不到的，如果是固体颗粒的话，大概是在1～1.5mm左右
...

不是颗粒 是一个分子的大小   你知道吗？求赐教

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
18楼2016-05-14 21:04:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tkl0621

金虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 小落落1929 at 2016-05-14 21:04:32
不是颗粒 是一个分子的大小   你知道吗？求赐教
...

对不起，这么晚才回复你，我也不太清楚的
赞一下 回复此楼
19楼2016-05-30 11:27:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海阔天空-123

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

您好！我们可以帮助您对接检测
赞一下 回复此楼
20楼2016-06-08 11:25:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tkl0621 的主题更新
232/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 273求调剂 +36 麦小叮当 2026-04-06 43/2150 2026-04-08 01:20 by 1018329917
[考研] 313求调剂 +3 十六拾陆 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:20 by lbsjt
[考研] 331求调剂 +5 张元一 2026-04-07 6/300 2026-04-07 22:13 by hemengdong
[考研] 285求调剂 +11 AZMK 2026-04-05 17/850 2026-04-07 19:05 by 中飞院空管学院�
[考研] 求调剂 +11 张zic 2026-04-05 12/600 2026-04-07 17:20 by 橘咂！
[考研] 305分求调剂 +3 哈_哈_哈_哈_哈 2026-04-04 5/250 2026-04-07 14:49 by 哈_哈_哈_哈_哈
[考研] 307求调剂 +3 所念及所望 2026-04-06 3/150 2026-04-06 17:30 by 土木硕士招生
[考研] 283求调剂 +5 baiiyu 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:35 by 啵啵啵0119
[考研] 296求调剂 +3 汪！？！ 2026-04-05 5/250 2026-04-05 17:38 by 蓝云思雨
[考研] 312求调剂 +3 Say Never 2026-04-04 3/150 2026-04-05 11:19 by guoweigw
[考研] 材料求调剂 +10 呢呢妮妮 2026-04-01 10/500 2026-04-04 23:12 by 无际的草原
[考研] 。 +5 雾与海 2026-04-02 6/300 2026-04-04 19:53 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +4 是可乐不是可乐 2026-04-04 4/200 2026-04-04 19:41 by 唐沐儿
[考研] [调剂信息]085408光电信息 求调剂 总分291分数一英一 +3 iz11az 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:09 by 蓝云思雨
[考研] 334求调剂 +8 曾仰之 2026-04-03 8/400 2026-04-04 11:16 by w_xuqing
[考研] 0710生物学336分求调剂 +6 kiyy 2026-04-01 8/400 2026-04-04 10:10 by kiyy
[考研] 085600，320分求调剂 +6 大馋小子 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:54 by dongzh2009
[考研] 一志愿安徽大学计算机科学与技术学硕，331分求调剂 +5 蒋昌鹏qtj 2026-04-01 5/250 2026-04-02 08:10 by fxue1114
[考研] 379求调剂 +3 ?苦瓜不苦 2026-04-01 3/150 2026-04-01 20:09 by 暮云清寒
[考研] 一志愿北交材料工程总分358 +5 cs0106 2026-04-01 7/350 2026-04-01 11:45 by wangjy2002
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭