应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 分类/鉴定 » 培养的多环芳烃细菌，最近送样去北京检测，pcr扩增无果
232/3返回列表上一页123下一页
查看: 2060  |  回复: 22
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
11楼2016-03-21 07:24:26
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1 PAHs degrader在实验过程中的的确确经常有杂菌
2 正确的做法是在PAHs 平板上长出来后，持续在R2A或者LB平板上分离纯化3-5次，获得的单菌落测试其降解能力，如果依然具有降解能力，就进行保种
3 测序的时候，自己做PCR， TA克隆，然后送去持续。很多人不喜欢用TA克隆测序，而习惯用PCR，我个人认为，这样不好！
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

tkl0621 tkl0621
致良知
12楼2016-03-22 09:17:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ddyant

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1. 从峰图看模板应该是纯的，否则同一位置应该有不同高度的套峰，所以我怀疑技术人员的解释有些问题，至少你这次这个峰图看不出有DNA交叉污染迹象。
2. 技术人员解释说细菌壁太厚没打开，我认为这个解释有一定道理。从峰图看锐利度明显不够，造成这个原因的因素有很多，试剂，反应温度，模板量都有可能。测序公司走样都是模式化的也就是第一个启动cycle的时间可能就是3-5分钟左右，后面的解链时间更短。如果第一次细胞没打开后面可能要到多个循环后细胞才被裂开，最后峰图可能就跑不出来。
3.个人建议你先采用上面网友提到的菌落PCR建议，第一个循环95度用10-15分钟裂细胞从而增加模板浓度。如果能扩出来基本就可以确定是模板量不够导致的。当然菌落PCR也有干扰问题，如果直接PCR还没有结果建议先用95度裂细胞10-15分钟，然后离心取上清DNA做PCR模板减少其它细胞组分干扰。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

tkl0621
好好学习，天天向上，做个合格的搬砖人
13楼2016-03-23 04:30:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tkl0621

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by ddyant at 2016-03-23 04:30:53
1. 从峰图看模板应该是纯的，否则同一位置应该有不同高度的套峰，所以我怀疑技术人员的解释有些问题，至少你这次这个峰图看不出有DNA交叉污染迹象。
2. 技术人员解释说细菌壁太厚没打开，我认为这个解释有一定道理 ...

非常感谢，好专业的回答

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
14楼2016-03-23 21:25:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tkl0621

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by quiller2000 at 2016-03-22 09:17:58
1 PAHs degrader在实验过程中的的确确经常有杂菌
2 正确的做法是在PAHs 平板上长出来后，持续在R2A或者LB平板上分离纯化3-5次，获得的单菌落测试其降解能力，如果依然具有降解能力，就进行保种
3 测序的时候，自己 ...

谢谢，值得学习

发自小木虫Android客户端
回复此楼
15楼2016-03-23 21:26:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小落落1929

新虫 (正式写手)
请问多环芳烃分子的尺寸是多少  指大致的长宽高

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
16楼2016-05-13 19:21:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tkl0621

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 小落落1929 at 2016-05-13 19:21:44
请问多环芳烃分子的尺寸是多少  指大致的长宽高

溶解到丙酮是看不到的，如果是固体颗粒的话，大概是在1～1.5mm左右

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
17楼2016-05-14 13:47:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小落落1929

新虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by tkl0621 at 2016-05-14 13:47:14
溶解到丙酮是看不到的，如果是固体颗粒的话，大概是在1～1.5mm左右
...

不是颗粒 是一个分子的大小   你知道吗？求赐教

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
18楼2016-05-14 21:04:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tkl0621

金虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by 小落落1929 at 2016-05-14 21:04:32
不是颗粒 是一个分子的大小   你知道吗？求赐教
...

对不起，这么晚才回复你，我也不太清楚的
赞一下 回复此楼
19楼2016-05-30 11:27:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海阔天空-123

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

您好！我们可以帮助您对接检测
赞一下 回复此楼
20楼2016-06-08 11:25:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tkl0621 的主题更新
232/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +15 低垂的野花 2026-07-31 20/1000 2026-08-01 14:10 by gltch
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +15 布布和一二 2026-07-30 18/900 2026-08-01 13:56 by gltch
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 8/400 2026-08-01 13:53 by y4XuShGyllvT
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 10/500 2026-08-01 13:51 by y4XuShGyllvT
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 7/350 2026-08-01 13:49 by y4XuShGyllvT
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jzg3xk1po8 2026-07-31 10/500 2026-08-01 13:49 by y4XuShGyllvT
[基金申请] 小木虫看见有人已经知道结果了 +16 1234567wang 2026-07-25 20/1000 2026-08-01 08:57 by type2type
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +14 wangze12014 2026-07-28 18/900 2026-07-31 18:35 by lzchaihuo
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +8 锦衣卫寒战 2026-07-28 8/400 2026-07-31 18:13 by beefly
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[考博] 申请2027年材料/化学类博士 10+3 考研老狗? 2026-07-25 5/250 2026-07-30 19:33 by 白色木鱼
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[基金申请] 今年的WR进展到哪一步了？ +5 wsgjhwz 2026-07-25 9/450 2026-07-30 12:59 by 可淡不可忘
[有机交流] 产物和副产物价值比较 30+4 小汤02 2026-07-27 5/250 2026-07-30 12:44 by czyzsu
[基金申请] 时间戳他又来了 +14 晓晓爱翠翠 2026-07-26 17/850 2026-07-29 16:30 by 呵呵二哥
[有机交流] 这个自发加氧反应的机理是什么？ 50+4 YUAN2273 2026-07-25 7/350 2026-07-29 12:27 by xiaobenpu
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 11/550 2026-07-29 05:50 by drbart
[基金申请] 准备明年的基金了 +5 Tide man 2026-07-27 5/250 2026-07-28 09:25 by newfuzzy1
[分析] 水蒸气蒸馏法乳化现象 +3 月光娇娇 2026-07-26 3/150 2026-07-26 23:25 by caiyun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭