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求助关于定点突变 去甲基化之后电泳无条带 转化无斑 已有1人参与
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现在不确定是不是载体出了问题，我从头开始说吧 1.去年开始做定点突变，目的片段链接pET-28a 转化到jm109进行甲基化，提取质粒用全式金试剂盒先进行PCR 然后用去甲基化酶消化，转化到BL21，验证位点都很顺利。 2.年末发现目的片段有一些问题 然后在目的片段两段加了Sal 1和Xho 1 位点连接了pET-21b 转化到jm109 都很顺利 3.问题来了，提取的质粒条带和以前提取的质粒条带不一样（下附图，左侧三个），突变PCR后有条带，去甲基化消化一小时后电泳 没有条带了 正常应该是有的，然后转化也没有斑， 从头到尾只是增加了两个酶切位点 换了载体 ，但是这些和去甲基化酶消化的位点不冲突，想问问有没有做过的 给解答下 万分感谢！！！  3.20.jpg |
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4楼2016-03-20 10:44:19
原海亮
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【答案】应助回帖
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zliean: 金币+5 2016-03-28 10:55:14
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zliean: 金币+5 2016-03-28 10:55:14
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去甲基化我不太了解，只是你对比两次质粒不一样是怎么对比的，做pcr？还是做酶切？ 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-03-20 09:57:05
star013 
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3楼2016-03-20 10:01:15
原海亮
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5楼2016-03-20 11:18:41