| 查看: 1244 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
求助关于定点突变 去甲基化之后电泳无条带 转化无斑 已有1人参与
|
||
|
现在不确定是不是载体出了问题，我从头开始说吧 1.去年开始做定点突变，目的片段链接pET-28a 转化到jm109进行甲基化，提取质粒用全式金试剂盒先进行PCR 然后用去甲基化酶消化，转化到BL21，验证位点都很顺利。 2.年末发现目的片段有一些问题 然后在目的片段两段加了Sal 1和Xho 1 位点连接了pET-21b 转化到jm109 都很顺利 3.问题来了，提取的质粒条带和以前提取的质粒条带不一样（下附图，左侧三个），突变PCR后有条带，去甲基化消化一小时后电泳 没有条带了 正常应该是有的，然后转化也没有斑， 从头到尾只是增加了两个酶切位点 换了载体 ，但是这些和去甲基化酶消化的位点不冲突，想问问有没有做过的 给解答下 万分感谢！！！  3.20.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有139人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
star013 
新虫 (知名作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1488.5
- 散金: 831
- 红花: 33
- 帖子: 5395
- 在线: 493.3小时
- 虫号: 1401381
- 注册: 2011-09-14
- 专业: 法学
3楼2016-03-20 10:01:15
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zliean: 金币+5 2016-03-28 10:55:14
感谢参与，应助指数 +1
zliean: 金币+5 2016-03-28 10:55:14
|
去甲基化我不太了解，只是你对比两次质粒不一样是怎么对比的，做pcr？还是做酶切？ 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-03-20 09:57:05
4楼2016-03-20 10:44:19
原海亮
木虫 (著名写手)
- 应助: 232 (大学生)
- 金币: 4607.4
- 散金: 3521
- 红花: 33
- 帖子: 1804
- 在线: 375.4小时
- 虫号: 1392705
- 注册: 2011-09-06
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2016-03-20 11:18:41
100