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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原核表达
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qibingli

金虫 (小有名气)

[交流] 原核表达

本人正在做IBDV VP2基因的原核表达，重组阳性质粒经酶切、PCR鉴定都正确，可就是不表达，请各为好心的虫友帮忙分析一下原因。
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天行健，君子以自强不息！
1楼 2008-10-18 11:53:55
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xiaoyao10022001

银虫 (初入文坛)
说的太粗略了，没有办法分析的，应当尽量具体说明如用什么菌种，用什么载体，在什么条件下表达；有具体的条件下才好分析。
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2楼2008-10-18 12:58:55
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
一 做个IPTG诱导的浓度梯度
二 做个温度的梯度
三 最后还不行就做个不同菌株的
四 要不就换不同的培养液试试
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3楼2008-10-18 16:26:53
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smallcat227

木虫 (著名写手)
1.诱导时要保证菌体不能太老，此时取点菌液，分别涂在不含抗生素和含抗生素的平板上，看看这时质粒丢失情况，如果此时质粒丢失很严重，可能会导致目标蛋白表达很少。此时应该是楼主的目标蛋白毒性很大导致质粒不稳定，这时可以选择本地表达底的菌株作为宿主菌;
2.看看你的目的蛋白的基因序列是否含有大肠杆菌的稀有密码子，特别是在N段开始表达的部分;
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4楼2008-10-18 16:37:32
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
要先分析下基因是否合适原核表达．
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5楼2008-10-18 16:56:29
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tiantianup007

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by skkyy88888 at 2008-10-18 16:56:
要先分析下基因是否合适原核表达．

怎么分析？
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6楼2008-10-18 17:58:27
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tiantianup007

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by qibingli at 2008-10-18 11:53:
本人正在做IBDV VP2基因的原核表达，重组阳性质粒经酶切、PCR鉴定都正确，可就是不表达，请各为好心的虫友帮忙分析一下原因。

测序没有？
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7楼2008-10-18 18:55:23
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