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tommylike

铜虫 (小有名气)

[求助] 基因克隆 已有1人参与

新人。我们通过全基因测序获得了基因的序列信息。
(1)本人是打算做某个基因在果实发育不同阶段的表达情况,按理说是只需要根据cds的序列设计引物,在RNA反转录后做定量表达分析就可以了。问:我在做qPCR的时候需不需要对设计引物所扩增的那段序列也测序,来检验下是不是目的片段呢?
(2)我觉得应该把基因全长的信息也再确定下,这时候是不是需要对测序得到的序列信息进行验证呢?即要克隆全长吗?怎么克隆全长啊?用race,还是在基因的两端进行设计引物,然后送pcr产物到公司测序就可以?但是这样怎么能保证p出来基因是全长呢?
这方面完全不懂啊,大家给点帮助。
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1,应该在设计引物的时候检测一下引物特异性,及所扩增片段的特异性,Blast就可以。然后对引物进行检测,包括扩增效率和扩增特异性。达标就可以,应该不用测序。
2,基因全长应该可以在相关网站找到你的物种的。
2楼2016-03-19 10:59:29
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