| 查看: 972 | 回复: 5 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
laoyongmin新虫 (初入文坛)
|
[求助]
Qiagen Ni-NTA Spin Kit 缓冲液选择 已有2人参与
|
||
| 本人目前在做His-tagged蛋白纯化，用于后续酶活测定。用的是Qiagen Ni-NTA Spin Kit，说明书推荐的是磷酸钠缓冲液（非变性条件下），含50 mM NaH2PO4，300 mM NaCl，及不同浓度咪唑，pH8.0。然而，根据已有文献（和我是同样的酶），细菌裂解用的缓冲液是25 mM MOPSO，pH7.2，10 mM MgCl2，10% v/v甘油（原文“Bacterial pellets were resuspended in 3 ml 25 mM 3-(N-morpholino)-2–hydroxypropanesulfonic acid (MOPSO), pH 7.2, 10 mM MgCl2, 10% v/v glycerol, and purified using Ni-NTA spin columns (Qiagen, www.qiagen.com) for His-tagged proteins, according to the manufacturer’s instructions”）。我想用文献的缓冲液，应该往里面加相应浓度的咪唑，（1）还要加300 mM NaCl吗？（说明书“All buffers should have sufficient ionic strength to prevent nonspecific interactions between proteins and the Ni-NTA matrix. The minimum salt concentration during binding and washing steps should be 300 mM NaCl. The maximal concentration is 2 M NaCl”）（2）pH也想维持7.2，一定要8.0吗？（3）如果只需加500 mM咪唑洗脱收集（不加300 mM NaCl，pH维持7.2），收集液可以直接用于酶活测定吗？（4）如果必须加300 mM NaCl，最后必须脱盐，再换成文献缓冲液吗？（这样，这个试剂盒岂不没有快速简单的优势了？） |
回复此楼» 猜你喜欢
招收生物学/细胞生物学调剂
已经有4人回复
-
一志愿武汉理工，总分321，英一数二，求老师收留。
已经有5人回复
-
324求调剂
已经有8人回复
-
284求调剂
已经有12人回复
-
348求调剂
已经有3人回复
-
329求调剂
已经有7人回复
-
求调剂，一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕
已经有4人回复
-
考研调剂
已经有9人回复
-
304材料求调剂
已经有4人回复
-
一志愿郑大085600，310分求调剂
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 帮忙翻译一下这句话，感谢
已经有1人回复
- 镍柱重生后与原先颜色不同
已经有4人回复
- Avian-Induced Pluripotent Stem Cells Derived Using Human Reprogramming Factors
已经有2人回复
- 跪问，带有SUMO标签的蛋白，一般过柱用什么柱（希望能提供柱子的详细信息）
已经有0人回复
- 生物技术各种实验protocol征集
已经有55人回复
- 一小段文献中方法的问题？？？有点没看明白
已经有2人回复
hc-material
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +702 - BioEPI: 1
- 应助: 517 (博士)
- 金币: 462.9
- 散金: 18028
- 红花: 313
- 帖子: 3594
- 在线: 518.8小时
- 虫号: 4027804
- 注册: 2015-08-18
- 性别: GG
- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
6楼2016-05-13 16:03:26
Champanzee
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 210.1
- 红花: 3
- 帖子: 30
- 在线: 12.3小时
- 虫号: 1556792
- 注册: 2011-12-30
- 性别: MM
- 专业: 电力系统
2楼2016-03-17 23:30:58
laoyongmin
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1017
- 帖子: 10
- 在线: 7.8小时
- 虫号: 1380047
- 注册: 2011-08-25
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
3楼2016-03-18 10:05:19
Champanzee
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 210.1
- 红花: 3
- 帖子: 30
- 在线: 12.3小时
- 虫号: 1556792
- 注册: 2011-12-30
- 性别: MM
- 专业: 电力系统
4楼2016-03-18 23:03:58
6