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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

[交流] 请问高保真酶对PCR产物酶切和测序有影响吗?

我用的高保真酶扩增的片段,想直接进行PCR产物酶切,但是担心由于 它的3-5‘端的校正活性对残留,将会在酶切的时候降解已经被内切酶切开的片段末端导致酶切失败,不知道这个可能性有多大呢?


另外就是Pfu进行PCR扩增的时候,跑多少个循环合适呢?35个循环会不会多了导致出错?

最后就是听说将PCR产物进行测序的时候,如果是用高保真酶P的话会影响测序的结果,请问这个是真的吗?
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

谢谢楼上的,这样我就放心了
4楼2008-10-17 15:54:27
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cdl007

木虫 (正式写手)

酶切主要是考虑酶切位点的保护碱基,如果你保护碱基加对了就问题不太大
35个循环也好,30个循环也好,理论上有可能出错,实际上可能性很小,完全可以不考虑他们的差别
2楼2008-10-16 23:01:09
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

第一个问题: 不用担心,不会降解你的酶切位点。
第二个问题:循环数不是问题,30 35都可以,建议在35
第三个问题:高保真酶对你的测序肯定没有影响的,我以前用高保真酶的时候根本不测序,因为不会出现碱基不对的现象
3楼2008-10-17 10:31:06
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