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小李纸11银虫 (正式写手)
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[求助]
求助，现在需要自己构建重组质粒，怎样选择合适的限制性内切酶呢。。。已有3人参与
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| 我已经把含有目的基因的质粒从大肠杆菌里提出来了，现在需要把它从该质粒上切下来，然后连接到毕赤酵母的空质粒上，请问我该如何选择合适的酶进行切割呢？需要考虑的因素有哪些呢？还有。。。是用双酶切还是单酶切比较合适呢？谢谢啦。。。 |
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cp0713
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
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- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
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你直接看酵母空载有哪些限制酶酶切位点（目的基因不能含有该酶切位点），选两个离的较远的，然后开始设计带酶切位点的引物，pcr把目的片段从重组质粒p出来，然后双酶切酵母空载和pcr回收产物，连接，转化到大肠，假阳性鉴定，提质粒酶切鉴定，测序～完成了！ 发自小木虫Android客户端 |
15楼2016-05-04 00:01:09
2楼2016-03-15 11:28:45
小李纸11
银虫 (正式写手)
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- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
3楼2016-03-15 11:55:55
4楼2016-03-15 13:24:33