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寒心季

新虫 (初入文坛)

[求助] 测序正确的质粒重新转化后还有必要再测序吗？ 已有1人参与

求问，原先已经够好的基因沉默载体质粒（测序正确），由于量不够所以重新转化DH5α了，经过菌落PCR验证后就挑取了一个克隆摇菌提质粒了，还有必要再去测序吗？下游实验用来做RNAi和TRV介导的基因沉默的。
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1楼 2016-03-14 21:15:08
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
寒心季: 金币+5, ★有帮助 2016-03-15 08:50:53
构建载体时候没有保存有相关克隆或者表达菌株么？如果量不够可以用保存的菌株再摇菌提取质粒直接用就可以。你说的重新转化DH5a是指用的什么转化的？如果是已经测序保存菌种所摇取质粒做的就没有问题。
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2楼2016-03-14 21:34:32
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寒心季

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 21:34:32
构建载体时候没有保存有相关克隆或者表达菌株么？如果量不够可以用保存的菌株再摇菌提取质粒直接用就可以。你说的重新转化DH5a是指用的什么转化的？如果是已经测序保存菌种所摇取质粒做的就没有问题。

是这样的，相关克隆是去年这个时候做的的，平板已经污染处理掉了；表达菌株的菌液没有保存；转化的确实是测序正确保存菌种所提的质粒，那转入农杆菌GV3101感受态呢？会有影响吗？
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3楼2016-03-15 08:49:15
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卡维斯

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 寒心季 at 2016-03-15 08:49:15
是这样的，相关克隆是去年这个时候做的的，平板已经污染处理掉了；表达菌株的菌液没有保存；转化的确实是测序正确保存菌种所提的质粒，那转入农杆菌GV3101感受态呢？会有影响吗？...

用现提取的质粒没问题，我们构建载体时会在转入农杆菌前都会测序，但也会在克隆测序、表达酶切验证，转入后再PCR鉴定
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4楼2016-03-15 10:13:29
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